本文件按照GB/T 1.1-2020《標準化工作導則 第1部分：標準化文件的結構和起草規則》的規定起草。參考GB/T 5524 動植物油脂 扦樣；GB/T 26635 動植物油脂 生育酚及生育三烯酚含量測定 高效液相色譜法等規程內容。
本文件規定了用高效液相色譜儀同時測定植物油中 α-、β-、γ-、δ-生育酚及 α-、β-、γ-、δ-生育三烯酚含量的方法。本文件方法的檢出限為1mg/kg(樣品稱樣量為 0.5g，定容25mL)。
方法原理：
植物油樣用正己烷溶解，用甲醇水溶液均質提取后，通過高效液相色譜儀將各單體生育酚和生育三烯酚分離，依據標準溶液色譜保留時間對目標物質定性，采用外標法定量。
儀器：
除常用實驗儀器外，還包括以下儀器：
1.高效液相色譜系統。高壓泵；進樣器；柱溫箱：柱溫可調節在 30 ℃(可選擇)；
熒光檢測器：具有295nm 激發波長和330nm 的發射波長；數據處理系統。
推薦使用熒光檢測器，若無熒光檢測器，也可以使用紫外檢測器。如果使用紫外檢測器，波長應設置為292nm。
2.高效液相色譜分析柱：可選用 250 mm×4.6 mm，填充平均粒徑約為 4 μm 的 Poroshell 120 PFP 柱。注：柱的長度與直徑可根據實驗條件做相應選擇。
3.IKA 均質機。
4.高速冷凍離心機。
5.紫外分光光度計：能在精確波長處準確測定。帶10mm比色皿。
6.量簡：100mL。
7.移液管：5mL，10mL 和20mL。
8.容量瓶：50mL和25mL。
9.氮吹儀。
標準溶液制備：
用正己烷溶解標準物質，配制生育酚及生育三烯酚標準儲備液質量濃度為1.00 mg/mL，轉移至棕色標液瓶中，標準儲備液置于-18 °C冰箱中避光保存，最多放置一周。用移液管吸取5mL儲備液至樣品試管中，在溫度不超過40℃真空條件下，用氮吹儀除去正己烷。用移液管向試管中注入10mL甲醇(5.2)振蕩溶解殘余物。用帶10mm比色皿的紫外分光光度計(6.5)，在270nm～310nm之間選擇適當的波長測吸光度。測得的吸光度應在0.2~0.8之間。用吸光度除以表1中相應的校正系數計算濃度(用mg/mL表示)。
分別移取1mL上述標準儲備液于容量瓶中，定容至10mL，得到混合標準中間液。用90%甲醇稀釋成0.05, 1, 2, 4, 6, 8, 10 μg/mL的混合標準工作液，現配現用。標準工作液在0 ℃~4 ℃之間避光儲存。
試劑瓶外用鋁箔包裹。
樣品制備：
稱取油樣0.5g(精確到0.01)于50mL 離心管中，加入0.1g BHT 和1g 抗壞血酸，5mL 正己烷渦旋振蕩溶解，加入6mL 90%甲醇，9200(9000) r/min 均質 90 s，4 °C 下離心 5 min，收集水醇層于25mL 容量瓶中，重復3次，最后定容到25mL，過0.22μm 濾膜，待測。
試樣測定：
依次將空白溶液和試樣溶液注入高效液相色譜儀中，得到色譜圖，以色譜保留時間進行定性。根據標準曲線得到試樣溶液中不同形式維生素E的濃度，平行測定次數不少于兩次。不同形式維生素E色譜圖參見附錄 A。
重復性：
在重復性條件下，獲得的兩次獨立測定結果的絕對值不得超過算術平均值的10%，以大于這兩個測定值的算術平均值的10%的情況不超過5%為前提。
再現性：
在再現性條件下，獲得的兩次獨立測定結果的絕對值不得超過算術平均值的15%，以大于這兩個測定值的算術平均值的15%的情況不超過5%為前提。
更多詳情請見附件。
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