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[方法]1．將大腸桿菌TG1種到基本培養(yǎng)瓊脂板，37℃過夜。2．將基本培養(yǎng)瓊脂板上的大腸桿菌TGl再接種到含有15m12XTY培養(yǎng)基的100ml形瓶中。37℃振蕩培養(yǎng)過夜。3．用5ml夜培養(yǎng)的TGl接...
1．用溶于PBS的2m1抗原（10—1000ug/m1）包被免疫管，室溫過夜。碳酸鹽緩沖液也可使用。2．用PBS洗滌試管3次，并用2％MPBS封閉非特異性結合位點，放在旋轉(zhuǎn)的轉(zhuǎn)臺上，37℃l小時。3．...
1．使用廠商*的試劑盒對抗原進行*化。如果用DTT洗脫，可以采用NHS—SS*。2．用2％MPBS封閉1．5ml微量離心管，室溫1小時；然后，棄去封閉緩沖液。3．在1個1．5ml微量離心管中，用2％M...
抗體基因的突變導人可以是隨機的，也可以在特異性位點上。隨機導人突變?yōu)楹唵危乙膊恍枰茰y哪個位點是提高親和力的佳突變位點。隨機突變更接近體內(nèi)的體細胞高突變過程。導人隨機突變的一種常用方法是鏈改組。這...
抗體可以含有超過50個CDR殘基。因此帶來一個問題，就是選擇哪個CDR區(qū)和哪個CDR殘基進行突變。我們和其他小組的結果都顯示：定位于VHCDR3和VLCDR3的靶向突變是用噬菌體展示提高親和力的有效方...
利用含有目標受體的復雜混合物，對噬菌體展示肽文庫進行篩選。這適用于許多令人感興趣的生物體系，如血清、腦脊液及其他生物性體液和細胞或組織表面等。在此情況下，目標就是要鑒定出結合于特定受體分子或結合于一組...
在有偶合劑（couplingreagent）HATU（Sigma）和DMF（Sigma）的情況下，加入異硫氰酸熒光素I（fluoresceinisothiocyanateisomer1）（Sigma）...
如我們以前的論文所述，我們經(jīng)常將后幾輪篩選得到的序列轉(zhuǎn)移到能與大腸桿菌麥芽糖結合蛋白（MBP）融合表達的載體中去。這樣就能夠通過ELISA反應進行檢測（反應信號的強度通常與每個克隆所編碼的肽段的親和力...
成功的初級庫篩選將會得到一個或更多的能與受體特異性結合的肽段。這些分離得到的肽段的親和性一般為比較低的微摩爾級別，從而不能在基于細胞的實驗下檢測到信號。為了提高這些初始篩選到的肽段的親和性，可以通過低...
1油的覆蓋及反應體系的體積如果PCR儀不加熱反應小管的管蓋，你需要在反應混合物上覆蓋密度小的礦物油以防止蒸發(fā)。在反應小管的管蓋總是被加熱到高于96℃的PCR儀中，可以不加礦物油進行PCR反應。油覆蓋得...
包含有億萬個隨機肽段序列的大容量數(shù)據(jù)庫對多種蛋白靶分子是一個豐富的資源庫，例如包含細胞因子和生長因子配體、蛋白酶抑制劑和離子門通道。大多數(shù)情況下，肽段的配體通過將固定的純化后的蛋白在噬菌體展示文庫里掃...
一、大約100年前，法國化學家維克多·格林尼亞發(fā)現(xiàn)，將一個鎂原子同一個碳原子偶聯(lián)在一起，會將額外的電子推向這個碳原子，使得它能夠更容易同另外一個碳原子連接在一起。不過，科學家們發(fā)現(xiàn)，這樣的方法在創(chuàng)造簡...
以中科院院士、上海交通大學*微生物代謝重點實驗室教授鄧子新的研究團隊與中科院微生物研究所合作，近在多氧霉素（又名多抗霉素，寶麗安等）生物合成機理研究領域獲得突破，從多氧霉素生物合成全基因簇克隆并獲得3...
有多種不同的方法可使抗原有效地結合到免疫親和柱上。因為抗體是通過共價與微珠偶聯(lián)，而不是在溶液中，抗體—微珠／抗原作用完成所需的時間比抗體和抗原二者以游離狀態(tài)在溶液中所需的時間要長得多。因此，采用的方法...
特異性背景條帶的產(chǎn)生是由于多克隆抗體血清中的雜抗體或是待測抗原和樣品中其他成分，具有可被抗體識別的共同表位而產(chǎn)生的特異性交叉反應。后者在使用單克隆抗體時較普遍。非特異性擴散的背景主要是由于印跡膜封閉得...
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