神經(jīng)突出相關(guān)蛋白Slitrk1抗體的生wu素化標(biāo)記實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)

神經(jīng)突出相關(guān)蛋白Slitrk1抗體的生wu素化標(biāo)記實(shí)驗(yàn)要點(diǎn):

1. 新型血小板相關(guān)內(nèi)皮分泌蛋白SCUBE1抗體費(fèi)用 如在反應(yīng)混合液中有疊氮鈉或游離氨基存在,會(huì)抑制標(biāo)記反應(yīng)。因此,蛋白質(zhì)在反應(yīng)前要對(duì) 0.1mol/L碳酸qing鈉緩沖液或0.5mol/L硼酸緩沖液充分透析;

2.所用的NHSB及待生wu素化蛋白質(zhì)之間的分子比按蛋白質(zhì)表面的ε-氨基的密度會(huì)有所不同,選擇不當(dāng)則影響標(biāo)記的效率,應(yīng)先用幾個(gè)不同的分子比來(lái)篩選最適條件;

3.用NHSB量過(guò)量也是不利的,抗原的結(jié)合位點(diǎn)可能因此被封閉,導(dǎo)致抗體失活;

4.由于抗體的氨基不易接近可能造成生wu素化不足,此時(shí)可加入去污劑如 Triton x-100, Tween20等;

5.當(dāng)游離ε-氨基(賴氨酸殘基的氨基)存在于抗體的抗原結(jié)合位點(diǎn)時(shí),或位于酶的催化位點(diǎn)時(shí),生wu素化會(huì)降低或損傷抗體蛋白的結(jié)合力或活性;

6.生wu素還可能與不同的功能基團(tuán),如羰基、氨基、巰基、異咪唑基及ben酚基,也可與糖基共價(jià)結(jié)合;

7.交聯(lián)反應(yīng)后,應(yīng)充分透析,否則,殘余的生wu素會(huì)對(duì)生wu素化抗體與親和素的結(jié)合產(chǎn)生競(jìng)爭(zhēng)作用;

8.在細(xì)胞的熒光標(biāo)記實(shí)驗(yàn)中,中和親和素的本底低,但由于鏈霉親和素含有少量正電荷,故對(duì)某些細(xì)胞可導(dǎo)致高本底。

小鼠凋亡相關(guān)因子配體(mouse Fas Ligand)

小鼠酸性成纖維生長(zhǎng)因子(mouse a-FGF)

小鼠堿性成纖維生長(zhǎng)因子(mouse b-FGF/FGF-2)

小鼠Fibronectin（mouse Fibronectin）

小鼠Flt3(mouse Flt3)

小鼠Flt3配體(mouse Flt3 Ligand)

小鼠纖維連結(jié)蛋白(mous FN)

小鼠Fractalkine（mouse Fractalkine）

小鼠纖維蛋白原(mouse Fibrinogen)

小鼠Foxp3(mouse Foxp3)

小鼠半乳糖凝集素-9(mouse Galectin-9)

小鼠胃泌素(mouse Gastrin)

小鼠Ghrelin(mouse Ghrelin)

小鼠胰高血糖素樣肽-1(mouse GLP-1)

小鼠胰高血糖素(mouse Glucagon)

小鼠GRO(mouse GRO)

小鼠神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞衍化營(yíng)養(yǎng)因子(mouse GDNF)

小鼠生長(zhǎng)因子(mouse GH)

小鼠心肌轉(zhuǎn)錄因子3(mouse GATA3)

小鼠心肌轉(zhuǎn)錄因子4(mouse GATA4)

小鼠低氧誘導(dǎo)因子1α(mouse HIF-1α)