質粒抽提提取方法

質粒抽提（Plasmid Extraction）方法即去除 RNA，將質粒與細菌基因組 DNA分開，去除蛋白質及其它雜質，以得到相對純凈的質粒。提取質粒DNA的方法有很多種，從提取產量上分可分為微量提取、中量提取、大量提取，從使用儀器上分可分為一般提取和試劑盒方法提取，從具體操作方法分可以分為堿裂解法、煮沸法、牙簽法等，各種不同的方法各有其優缺點，根據不同的實驗目的可以采用合適的提取方法。

一、使用質粒提取試劑盒提取質粒時請參考具體試劑盒的操作說明。

二、堿裂解手提法:此方法適用于小量質粒DNA的提取，提取的質粒DNA可直接用于酶切、PCR擴增、銀染序列分析。方法如下:

1、接1%含質粒的大腸桿菌細胞于2mlLB培養基。

2、37℃振蕩培養過夜。

3、取1.5ml菌體于Ep管(離心管)，以4000rpm離心3min，棄上清液。

4、加0.lml溶液I(1%葡萄糖，50mM/LEDTApH8.0，25mM/LTris-HClpH8.0)充分混合。

5、加入0.2ml溶液II(0.2mM/LNaOH，1%SDS)，輕輕翻轉混勻，置于冰浴5min.

6、加入0.15m1預冷溶液III(5mol/LKAc，pH4.8)，輕輕翻轉混勻，置于冰浴5min.

7、以10，000rpm離心20min，取上清液于另一新Ep管

8、加入等體積的異丙醇，混勻后靜置10min.

9、以10，000rpm離心20min，棄上清。

10、用70%乙醇0.5ml洗滌一次，抽干所有液體。

11、待沉淀干燥后，溶于50ulTE緩沖液中(或60℃溫育去離子水)