高效液相色譜儀（HPLC）應用技巧匯總

    高效液相色譜儀（HPLC）也叫高壓液相色譜、高速液相色譜、高分離度液相色譜等，它是在經典液相色譜法的基礎上，于60年代后期引入了氣相色譜理論而迅速發展起來的。它與經典液相色譜法的區別是填料顆粒小而均勻，小顆粒具有高柱效，但會引起高阻力，需用高壓輸送流動相，故又稱高壓液相色譜。又因分析速度快而稱為高速液相色譜。

色譜法的分離原理是：溶于流動相中的各組分經過固定相時，由于與固定相(station phase)發生作用(吸附、分配、排阻、親和)的大小、強弱不同，在固定相中滯留時間不同，從而先后從固定相中流出。又稱為色層法、層析法。

HPLC注意事項：

1.流動相必須用HPLC級的試劑，使用前過濾除去其中的顆粒性雜質和其他物質(使用0.45um或更細的膜過濾)。

2.流動相過濾后要用超聲波脫氣，脫氣后應該恢復到室溫后使用。

3.不能用純乙腈作為流動相，這樣會使單向閥粘住而導致泵不進液。

4.使用緩沖溶液時，做完樣品后應立即用去離子水沖洗管路及柱子一小時，然后用甲醇(或甲醇水溶液)沖洗40分鐘以上，以充分洗去離子。對于柱塞桿外部，做完樣品后也必須用去離子水沖洗20ml以上。

5.長時間不用儀器，應該將柱子取下用堵頭封好保存，注意不能用純水保存柱子，而應該用有機相(如甲醇等)，因為純水易長霉。

6.每次做完樣品后應該用溶解樣品的溶劑清洗進樣器。

7.C18柱不能進蛋白樣品，血樣、生物樣品。

8.堵塞導致壓力太大，按預柱→混合器中的過濾器→管路過濾器→單向閥檢查并清洗，清洗方法；

①以異丙醇作溶劑沖洗：

②放在異丙醇中間用超聲波清洗；

9.氣泡會致使壓力不穩，重現性差，所以在使用過程中要盡量避免產生氣泡。

10.如果進液管內不進液體時，要使用注射器吸液：通常在輸液前要進行流動相的清。

11.要注意柱子的PH值范圍，不得注射強酸強堿的樣品，特別是堿性樣品。

12.更換流動相時應該先將吸濾頭部分放入燒杯中邊振動邊靖洗，然后插入新的流動相中。更換無互溶性的流動相時要用異丙醇過渡一下。