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    熒光定量檢測試劑盒試驗假陽性解決方法

    時間:2023/2/14閱讀:484
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    一、引物設計不合適:選擇的擴增序列與非目的擴增序列有同源性,因而在進行PCR擴增時,擴增出的PCR產物為非目的性的序列。靶序列太短或引物太短,容易出現假陽性。需重新設計引物。
    二、靶序列或擴增產物的交叉污染:這種污染有兩種原因:一是整個基因組或大片段的交叉污染,導致假陽性。這種假陽性可用以下方法解決:

    1、操作時應小心輕柔,防止將靶序列吸入加樣器內或濺出離心管外。

    2、除了酶及其他不耐高溫的物質外,所有試劑或器材均應高壓消毒。所用離心管及進樣槍頭均應一次性使用。

    3、必要時,在加標本前,反應管和試劑用紫外線照射,以破壞存在的核酸。二是空氣中的小片段核酸污染,這些小片段比靶序列短,但有一定的同源性。可互相拼接,與引物互補后,可擴增出PCR產物,而導致假陽性的產生,可用巢式PCR方法來減輕或消除。

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