一抗的選擇考慮因素

抗體(英語:antibody)，抗體是一類能與抗原特異性結(jié)合的免疫球蛋白。(免疫球蛋白不僅僅只是抗體)是一種由漿細(xì)胞(效應(yīng)B細(xì)胞)分泌，被免疫系統(tǒng)用來鑒別與中和外來物質(zhì)如細(xì)菌、病毒等的大型Y形蛋白質(zhì)，僅被發(fā)現(xiàn)存在于脊椎動物的血液等體液中，及其B細(xì)胞的細(xì)胞膜表面。檢測任何目的靶蛋白都有不止一種抗體可供選擇，為縮小抗體的選擇范圍選中合適的抗體，需要考慮的因素：

1. 實驗應(yīng)用的類型

一般抗體說明書都列出該抗體經(jīng)試驗驗證過適用于何種分析類型，如：可以應(yīng)用于WB /IHC /ICC /ELISA分析等，如果抗體說明書沒有說明提及的應(yīng)用類型，并不意味著該抗體不適用于此種分析應(yīng)用類型，而僅是說明尚未經(jīng)過此種分析試驗驗證。如果抗體不適用某些分析試驗，會在抗體說明書上標(biāo)注出來不適于某分析試驗。

2. 樣本蛋白的提取或處理

某些抗體要求樣本經(jīng)過某些特殊處理，例如：許多抗體只識別還原和變性的、表位已暴露不受二級四級結(jié)構(gòu)阻礙的蛋白樣本，另一方面，某些抗體只識別天然折疊的蛋白。當(dāng)選擇免疫組化的抗體時，應(yīng)注意某些抗體只識別未固定的冷凍的組織，而另一些抗體則使用于無需抗原修復(fù)解交聯(lián)步驟的甲醛固定石蠟包埋的組織，這些都會在抗體說明書上應(yīng)用部分標(biāo)示出來。

所以綜上所述：

適用于IP（天然蛋白）的抗體不一定適用于WB（表位暴露）

適用于WB的不一定適用于IHC

適用于IHC-P（抗原修復(fù)）的不一定適用于IHC-Fr（不修復(fù)）

購買前，務(wù)必仔細(xì)閱讀抗體說明書！

3. 樣本的物種

一般來說，在使用偶聯(lián)二抗結(jié)合無偶聯(lián)物的一抗時，一抗宿主動物的物種選擇比較重要，對與免疫組化而言，盡可能選擇與樣本不同種系物種的一抗，從而避免二抗與樣本內(nèi)源性免疫球蛋白產(chǎn)生交叉反應(yīng)。一抗的來源主要有兔子和小鼠這兩個物種，意思也就是，如果你的樣本是兔子的，那就避免買兔來源的一抗；如果你的樣本是小鼠的，那就避免買小鼠源的一抗。

4. 單克隆與多克隆

由一種克隆產(chǎn)生的特異性抗體叫做單克隆抗體，單克隆抗體能目標(biāo)明確地與單一的特異抗原決定簇結(jié)合。同一個抗原決定簇在機體內(nèi)也可以由好幾種克隆來產(chǎn)生抗體，形成好幾種單克隆抗體混雜物，稱為多克隆抗體。

在抗原抗體反應(yīng)中，一般單克隆抗體特異性強，但親和力相對小，檢測抗原靈敏度相對就低；而多克隆抗體特異性稍弱，但抗體的親和力強，靈敏度高。