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    有關夾心ELISA檢測

    時間:2021/11/29閱讀:596
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    檢測

    辣根過氧化物酶 (HRP) 和堿性磷酸酶 (ALP) 是 ELISA 分析中使用*泛的兩種酶。

    要考慮到某些生物材料具有高水平的內源酶活性(例如肺泡細胞中的高水平 ALP、紅細胞中的高水平過氧化物酶),這可能會導致非特異性信號。如有必要,用左旋咪唑(針對 ALP)或用 0.3% H2O2 的甲醇溶液(針對過氧化物酶)進行另外的阻斷處理。

    ALP 底物
    對硝基苯磷酸鹽 (pNPP) 是大多數應用中廣泛使用的底物。在室溫下孵育 15-30 分鐘后,在 405 nm 處測定硝基苯酚呈現的黃色,加入等體積的 0.75 M NaOH 可終止反應。

    HRP 顯色液
    HRP 的底物為過氧化氫。過氧化氫的裂解與氫供體的氧化偶聯,反應期間氫供體的氧化使顏色發生變化。

    TMB(3,3',5,5'-四甲基聯苯胺)
    每孔添加 TMB 溶液,孵育 15–30 分鐘,添加等體積的終止液 (2 M H2SO4),然后在 450 nm 處讀取光密度。

    OPD(鄰苯二胺2鹽酸鹽)
    在 492 nm 處測定終產物。底物對光敏感,應避光保存。

    ABTS(2,2'-聯氮-雙-[3-乙基-苯并噻唑啉-6-磺酸]二銨鹽)
    終產物為綠色,可在 416 nm 處測定光密度。

    某些酶底物被認為是有害的(潛在致癌物),因此始終要小心處理并佩戴手套。


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