血細(xì)胞分離實驗步驟

細(xì)胞凋亡檢測由紅細(xì)胞,白細(xì)胞,血小板等組成.實驗中常用白細(xì)胞來做研究,如炎癥滲出,細(xì)胞遷移,識別等都涉及到白細(xì)胞.白細(xì)胞又分為:粒細(xì)胞,淋巴細(xì)胞,單核細(xì)胞等.它們具有不同的功能.實驗中常需要分離血細(xì)胞方能進行。

這里主要論述人外周白細(xì)胞的分離，主要是中性粒細(xì)胞(Neutrophil)，淋巴細(xì)胞(Lymphocyte)，單核細(xì)胞(Monocyte)的分離。其它骨髓，脾淋巴細(xì)胞等分離可參，不同種屬間請注意分離液的選擇。

細(xì)胞分離中需要注意的幾個問題

1.如果您要做細(xì)胞培養(yǎng)，記住實驗中所用的試劑(分離液，洗滌液等)、器械等都要是無菌消毒的，并注意實驗中的無菌操作。

2. 離心轉(zhuǎn)速單位及時間：目前國外的文獻(xiàn)報道基本上用g為單位，注意g和轉(zhuǎn)速(rpm)的換算。

3.離心溫度：有的要求室溫，有的要求4攝氏度。實驗的操作要求盡可能熟練，連貫。

4.在用Ficoll分離單個核細(xì)胞(PBMC)時，通常含有少量的紅細(xì)胞，對于一般的實驗影響不大，如果實驗要求較高，可采取裂解液(有的需要無菌)，并注意裂解時間控制，以免影響單個核細(xì)胞的活性。

5. 在用Percoll配不連續(xù)梯度時(一般用高滲NaCl)，注意各成份體積的準(zhǔn)確性，否則密度與預(yù)期的不一樣，影響分離效果。

6.用全血離心效果比全血稀釋后再離心效果差，稀釋一般等體積稀釋一倍。

7.分離液與樣本的體積比：一般應(yīng)小于1：2(即一般為1體積分離液，2體積樣本，不宜超過2體積，小于2體積均可)

8.洗滌液的成分：不同文獻(xiàn)報道不一，有的使用PBS，有的為Hank’s，KRP等，可自己選定。主要是離子濃度及成份的不同，有的含有Mg2+,Ca2+。

9. 細(xì)胞凋亡檢測活性：0.2%臺盼藍(lán)染色3-5分鐘，鏡下觀察計數(shù)死亡細(xì)胞(藍(lán)染)
62749-46-6    *相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品    Amrinone Related Compound A    100mg
62-73-7    敵敵畏標(biāo)準(zhǔn)品    Dichlorvos (AS)    150mg
62571-86-2    *標(biāo)準(zhǔn)品    Captopril    200mg
62-54-4    醋酸鈣標(biāo)準(zhǔn)品    Calcium Acetate (AS)    1g
625120-81-2     伊班膦酸相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品        25mg
62-51-1     氯化乙酰甲*標(biāo)準(zhǔn)品    Methacholine Chloride (AS)    500mg
62498-67-3    西酞普蘭相關(guān)物質(zhì)D標(biāo)準(zhǔn)品        15mg
624742-53-6     *相關(guān)物質(zhì)D和F混合物標(biāo)準(zhǔn)品        20mg
62-44-2     *標(biāo)準(zhǔn)品    Phenacetin     500mg
62-44-2     非那西汀熔點標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)品        500mg
62391-99-5     丙戊酸相關(guān)物質(zhì)B標(biāo)準(zhǔn)品        50mg
細(xì)胞凋亡檢測