無乳支原體探針法熒光定量PCR試劑盒 返回列表頁

原理:
無乳支原體探針法熒光定量PCR試劑盒所謂實時熒光定量PCR技術，是指在PCR反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監測整個PCR進程，產品僅用于科研Z后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。
檢測方法
1.SYBRGreenⅠ法：
在PCR反應體系中，加入過量SYBR熒光染料，SYBR熒光染料特異性地摻入DNA雙鏈后，發射熒光信號，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發射任何熒光信號，從而保證熒光信號的增加與PCR產物的增加*同步。
SYBR定量PCR擴增熒光曲線圖
PCR產物熔解曲線圖
2.TaqMan探針法：
探針完整時，報告基團發射的熒光信號被淬滅基團吸收；PCR擴增時，Taq酶的5’-3’外切酶活性將探針酶切降解，使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離，從而熒光監測系統可接收到熒光信號，即每擴增一條DNA鏈，就有一個熒光分子形成，實現了熒光信號的累積與PCR產物的形成*同步。
參數規格：

無乳支原體探針法熒光定量PCR試劑盒運輸及保存：低溫運輸，-20℃保存，有效期一年。使用本試劑盒提供的陽性對照時，由于其濃度較高，一定要注意不要污染其他試劑和成分。在專門的區域操作。

特點優勢：
    1.   特異性：所有產品使用的引物均經過詳盡的生物信息學分析，經過TIANDZ及自建龐大數據庫的比對，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區段，可實現對細菌種屬及血清型的特異檢測，特異性均達到。
    2.   重現性：該系列所有產品均經過大量實驗菌株的驗證，重現性為。
    3.   靈敏性：該系列產品可實現對檢測菌的高靈敏檢測，當樣品中細菌的濃度達到103cfu/ml時，可實現對其的直接檢測，無需繁瑣的增菌過程。
    4.   實用性：檢測范圍廣，涵蓋了對人體危害較為嚴重的17種呼吸道及腸道致病菌，可實現對臨床樣品及其他環境取樣的快速檢測，整個檢測過程為3-4個小時。
 5.   優勢1：序列資源豐富，除TIANDZ公布的序列外，公司還進行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。
    6.   優勢2：該系列試劑盒均經過大量的保守性及特異性實驗驗證，憑借公司擁有的豐富的菌種資源，每一種檢測試劑盒均經過了20余種標準菌株和臨床菌株的保守性驗證及40余種近緣標準菌株和臨床菌株的特異性驗證，確保在使用過程中不會出現任何的假陽性及假陰性報告結果。
使用方法：
一、樣品采集：
1、食品樣品：樣品的采集與預培養按照樣品的采集與預培養按照菌檢驗要求進行。
2、血液樣品：用無菌注射器抽取受檢者靜脈血2mL，注入無菌EDTA2Na(或檸檬酸鈉)抗凝管，立即混勻。
3、糞便樣品：取糞便置于滅菌的收集管中送檢。
4、病灶部位樣品：取發病部位新鮮滲出物、粘液膿血送檢。
一、稀釋 PCR 陽性對照（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例）
1. 注意：由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產品穩定性和避免擴散傳染性病原，本產品不提供活體樣品做陽性對照，只提供可以直接使用的 DN段作為陽性對照。
2. 標記 6 個離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。
4. 在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照，充分震蕩 1 分鐘，得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
5. 換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用
6. 換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
7. 重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。
熒光定量PCR實驗步驟：
①產品僅用于科研取凍存已裂解的細胞，室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang，蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制)，清洗RNA沉淀。混勻后，4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復吹打幾次，使其*溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后，讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值，測定RNA溶液 濃度和純度。

鹽羥甲唑啉標準品  英文名稱：Oxymetazoline Hydrochloride   :151615

鹽羥考標準品  英文名稱：Oxycodone Hydrochloride CII  :124-90-3

羥考標準品  英文名稱：Oxycodone CII  :76-42-6

奧昔布寧標準品  英文名稱：Oxybutynin Chloride   :1508-65-2

羥甲標準品  英文名稱：Oxybenzone   :131-57-7

奧昔替林標準品  英文名稱：Oxtriphylline  :4499-40-5

鹽心得平標準品  英文名稱：Oxprenolol Hydrochloride   :6452-73-9

奧酚噠唑標準品  英文名稱：Oxfendazole   :53716-50-0

奧卡西平標準品  英文名稱：Oxcarbazepine   :28721-07-5

奧沙西泮標準品  英文名稱：Oxazepam CIV  :604-75-1

奧沙普秦標準品  英文名稱：Oxaprozin  :21256-18-8

氧雄龍標準品  英文名稱：Oxandrolone CIII  :53-39-4

奧沙利鉑對照品標準品  英文名稱：Oxaliplatin   :61825-94-3

唑西林鈉標準品  英文名稱：Oxacillin Sodium   :7240-38-2

鄰甲酰胺標準品  英文名稱：o-Toluenesulfonamide   :88-19-7

細胞氧化應激活性氧（ROS）NBT比色法定量檢測試劑盒  進口/國產  規格：100次

細胞氧化應激活性氧（ROS）WST-1比色法定量檢測試劑盒  進口/國產  規格：50次

卵母細胞成熟（OOCYTE MATURATION）培養液  進口/國產  規格：100毫升

卵母細胞凍存試劑盒  進口/國產  規格：50次

生長因子  進口/國產  規格：1ML

受精（fertilization）細胞培養液  進口/國產  規格：500毫升

胚胎組織培養液  進口/國產  規格：500毫升

活力熒光染色試劑盒  進口/國產  規格：50次

活力伊紅黑（eosin－nigrosin）染色試劑盒  進口/國產  規格：50次

活力和頂體反應三色（triple staining）染色試劑盒  進口/國產  規格：50次
無乳支原體探針法熒光定量PCR試劑盒Brevibacterium│ketosoreductum資源名稱降酮短桿菌分離基物:土壤人IFN-α ELISA試劑盒

Listeria│grayi資源名稱格氏李斯特氏菌提供形式:凍干物人B7-2/sCD86 ELISA試劑盒

Eupenicillium│brefeldianum資源名稱布雷正青霉提供形式:凍干物人IL-27 ELISA試劑盒

Eupenicillium│parvum資源名稱微細正青霉分離基物:土壤人IL-23 ELISA試劑盒

Talaromyces│ruber資源名稱紅色籃狀菌分離基物:植物塊根人MIF ELISA試劑盒

Eupenicillium│ochrosalmoneum資源名稱赭鮭色正青霉分離基物:玉米粉人TFPI ELISA試劑盒

Salmonella│enterica subsp. enterica資源名稱腸沙門氏菌腸亞種提供形式:凍干物人IP-10/CXCL10 ELISA試劑盒