紫草LAMP鑒定試劑盒使用方法

紫草LAMP鑒定試劑盒使用方法：

一、樣品采集：

1、食品樣品：樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照《食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)阪崎腸桿菌檢驗(yàn)要求進(jìn)行。

2、血液樣品：用無菌注射器抽取受檢者靜脈血2mL，注入無菌EDTA2Na(或檸檬酸鈉)抗凝管，立即混勻。

3、糞便樣品：取糞便置于滅菌的收集管中送檢。

4、病灶部位樣品：取發(fā)病部位新鮮滲出物、粘液膿血送檢。

一、稀釋 PCR 陽性對照（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例）

1. 注意：由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照，只提供可以直接使用的 DNA段作為陽性對照。

2. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。

3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。

4. 在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照，充分震蕩 1 分鐘，得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。

5. 換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。

6. 換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。

7. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的陽性對照。放冰上待用。

注：上述樣品建議經(jīng)過增菌后，收集培養(yǎng)物用于檢測。?

二、DNA提取：

可采用PCR試劑盒配備的DNA抽提液，按以下說明進(jìn)行DNA核酸的粗提。也可采購上海澤葉生物科技有限公司生產(chǎn)的DNA提取試劑盒(過柱法-熒光配套)或其他合適的商業(yè)化產(chǎn)品，并按照相應(yīng)試劑盒說明進(jìn)行操作。

1、液體培養(yǎng)物：取液體培養(yǎng)物100μL加到1.5mL無菌離心管中，8000rpm離心3min，盡量吸棄上清，加入50μL DNA抽提液充分混勻，100℃恒溫10min，13000rpm離心3min，取上清5μL進(jìn)行PCR反應(yīng)。

2、固體培養(yǎng)物：挑取單克隆菌落與50μL DNA抽提液充分混勻，100℃恒溫10min，13000rpm離心3min，取上清5μL進(jìn)行PCR反應(yīng)。

3、糞便樣品：挑取米粒大小糞便于滅菌離心管中，加入0.5mL生理鹽水，振蕩混勻，13000rpm離心3分鐘，棄上清，沉淀中加入50μL DNA抽提液充分混勻，100℃恒溫10min，13000rpm離心3min取上清5μL進(jìn)行PCR反應(yīng)。

4、其他液體標(biāo)本：取標(biāo)本2-3mL，13000rpm離心3min，棄上清，沉淀中加入50μL DNA抽提液充分混勻，100℃恒溫10min，13000rpm離心3min取上清5μL進(jìn)行PCR反應(yīng)。

注：陽性對照和陰性對照為已經(jīng)抽提好的核酸(無需提取)，直接取5μL加入到反應(yīng)體系中即可。由于陽性對照濃度較高，建議在樣品制備區(qū)域加入陽性對照。?

ACVR1B激活素A受體1B抗體

phospho-Androgen Receptor 磷酸化雄激素受體抗體

phospho-A Raf 磷酸化A-Raf抗體

ASAH2酰基鞘氨醇脫酰酶2抗體

ASAM脂肪細(xì)胞特異性粘附分子抗體

AAV5 capsid VP2 protein腺相關(guān)病毒5抗體

AMPK gamma 3腺苷酸活化蛋白激酶γ3抗體

AMPK beta 2腺苷單磷酸活化蛋白激酶β2抗體

phospho-APC1 磷酸化細(xì)胞周期末期促進(jìn)復(fù)合蛋白APC1抗體

ANAPC1細(xì)胞周期末期促進(jìn)復(fù)合蛋白APC1抗體

phospho-AKT2 磷酸化蛋白激酶B2抗體

phospho-APBB1 磷酸化鐵蛋白Fe65抗體

phospho-APBB1 磷酸化鐵蛋白Fe65抗體

phospho-Amyloid Precursor Protein 磷酸化APP淀粉樣肽前體蛋白抗體

phospho-Amyloid Precursor Protein 磷酸化APP淀粉樣肽前體蛋白抗體

phospho-ATF2 磷酸化活化復(fù)制因子2抗體

phospho-ATF2 磷酸化活化復(fù)制因子2抗體

phospho-APC1 磷酸化細(xì)胞周期末期促進(jìn)復(fù)合蛋白APC1抗體

ASAP1發(fā)育分化增強(qiáng)因子1抗體

phospho-ASAP1 磷酸化發(fā)育分化增強(qiáng)因子1抗體

AKT3蛋白激酶B3

Girdin肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白Girdin抗體

AKAP2蛋白激酶A2抗體

AT2R2血管緊張素Ⅱ受體2抗體