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    交鏈孢霉屬通用探針法熒光PCR檢測試劑盒樣品RNA的抽提

    時間:2022/9/27閱讀:269
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    交鏈孢霉屬通用探針法熒光PCR檢測試劑盒樣品RNA的抽提:

    ①取凍存已裂解的細胞,室溫放置5分鐘使其*溶解。

    ②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的,蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚相,中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。③RNA沉淀 將水相上層轉移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側壁上形成膠狀沉淀塊。

    ④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀。混勻后,4℃下7000rpm離心5分鐘。

    ⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。

    ⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時,先加入無RNA酶的水40μl用槍反復吹打幾次,使其*溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。

    2 RNA質量檢測

    1)紫外吸收法測定

    先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值,測定RNA溶液 濃度和純度。

    ① 濃度測定

    A260下讀值為1表示40 g RNA/ml。樣品RNA濃度(g/ml)計算公式為:A260 ×稀釋倍數× 40 g/ml。

    phospho-APBB1 (Ser175)磷酸化鐵蛋白Fe65抗體

    phospho-APBB1 (Ser347)磷酸化鐵蛋白Fe65抗體

    phospho-Amyloid Precursor Protein (Thr743)磷酸化APP淀粉樣肽前體蛋白抗體

    phospho-Amyloid Precursor Protein (Ser730)磷酸化APP淀粉樣肽前體蛋白抗體

    phospho-ATF2 (Ser322)磷酸化活化復制因子2抗體

    phospho-ATF2 (Thr51)磷酸化活化復制因子2抗體

    phospho-APC1 (Ser377)磷酸化細胞周期末期促進復合蛋白APC1抗體

    ASAP1發育分化增強因子1抗體

    phospho-ASAP1 (Tyr782)磷酸化發育分化增強因子1抗體

    AKT3蛋白激酶B3

    Girdin肌動蛋白結合蛋白Girdin抗體

    AKAP2蛋白激酶A2抗體

    AT2R2血管緊張素Ⅱ受體2抗體

    ASH1LASH1蛋白抗體

    AADACL2芳香乙酰胺脫乙?;笜拥鞍?抗體

    AAMP血管內皮細胞遷移蛋白抗體

    AKR1B10醛糖還原酶相關蛋白質抗體

    AKR1C2膽汁酸結合蛋白DDH2抗體

    ANGPTL3血管生成素樣蛋白3抗體

    Acylglycerol Kinase甘油酯激酶線粒體抗體

    phospho-alpha Adducin(Ser726)磷酸化內收蛋白a1抗體

    ATG16L2自噬體ATG16L2蛋白抗體


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