蕎麥源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒通用原則

 蕎麥源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒通用原則:

1, 先選擇好探針,然后設計引物使其盡可能的靠近于探針。

2, 擴增子的長度應不超過400bp,理想的*能在100-150bp內,擴增片斷約短,有效的擴增反應就越容易獲得。較短的擴增片斷也容易保證分析的一致性

3, 保持GC含量在20%和80%之間,GC富含區容易產生非特異反應,從而會導致擴增效率的降低,及在SG分析中非特異信號。

4, 為了保證效率和重復性,應避免重復的核苷酸序列,尤其是G(不能有4個連續的G)

5, 將引物和探針互相進行配對檢測,以避免二聚體和發卡結構的形成。

b),探針設計指導

1,在設計引物之前設計探針

2,探針的Tm值應在68-70℃之間,如果是目測探針,則要仔細審查GC富含區。

3,探針的5’端要避免有鳥an酸,5’G會有淬滅作用,即使被切割下來這種淬滅作用也還會存在

4,選擇C多于G的鏈作探針,G的含量多于C會降低反應效率,這時就應選擇配對的另一條鏈作為探針。

6, 探針應盡可能的短,不要超過30個bp。

7, 檢測探針的DNA折疊和二級結構。

HEC-1A, 人子宮內膜癌細胞系

Caki-1, 人腎透明細胞癌皮膚轉移細胞

Ishikawa, 人子宮內膜癌細胞系

ACHN, 人腎細胞腺癌細胞

JEC, 人子宮內膜腺癌細胞系

BPH-1, 人前列腺增生細胞

RL95-2, 人子宮內膜腺癌細胞系

Ca Ski, 人宮頸癌細胞

MCF-7 [MCF7], 人乳腺癌細胞系

Raw264.7, 小鼠單核巨噬細胞白血病細胞

GBC-SD, 人膽囊癌細胞

5637, 人膀胱癌細胞

CNE1, 人鼻咽癌細胞系

HT-29, 人結腸癌細胞

T24, 人膀胱癌細胞

5-8F, 人高轉移鼻咽癌細胞系

HCT116, 人結直腸癌細胞

LncaP, 人前列腺癌細胞

6-10B, 人鼻咽癌細胞系

lovo, 人結腸癌細胞

DU 145, 人前列腺癌細胞

Hep-2, 人喉癌細胞系

MDA-MB-231, 人乳腺癌細胞