草地夜蛾卵巢細胞；Sf9復蘇操作要點

草地夜蛾卵巢細胞；Sf9復蘇操作要點：

1）將培養基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養基。

2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內*解凍，使細胞能盡快通過zui易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。

3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內，將管內細胞轉移至準備好的離心管內，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次，均轉移至離心管內。

4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養基，吹打制成細胞懸液。

5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內，補加適量的培養基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內培養。

6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續的實驗。

mOPC, 小鼠少突膠質前體細胞

MA, 小鼠星形膠質細胞

MLF, 小鼠淋巴成纖維細胞

mRTEC, 小鼠腎小管上皮細胞

CSC, 小鼠心肌細胞

小鼠骨髓間充質干細胞（BMSCs）

MEF, 小鼠胚胎成纖維細胞

MM, 小鼠小膠質細胞

mCF, 小鼠心臟成纖維細胞

MN-c, 小鼠皮質神經元

 細胞名稱

人絨毛膜毛細血管內皮細胞

人羊膜上皮細胞

人絨毛間充質成纖維細胞

人羊膜間充質基質細胞

人絨毛膜間充質基質細胞

 正常細胞

NRK-52E，大鼠腎細胞

H9c2大鼠心肌細胞（ATCC來源）

C2C12, 小鼠肌原細胞

NIH/3T3, 小鼠成纖維細胞系

大鼠骨髓間充質干細胞（BMSCs）

HSC-T6, 大鼠肝星狀細胞系