豬圓環病毒通用型（PCV-Ⅰ）核酸檢測試劑盒碰到些檢測常見問題

豬圓環病毒通用型（PCV-Ⅰ）核酸檢測試劑盒檢測常見問題

1. cDNA產量的很低可能的原因：

1) RNA模板質量低

2) 對mRNA濃度估計過高

3)反應體系中存在反轉錄酶抑制劑或反轉錄酶量不足

4)同位素磷32過期

5)反應體積過大，不應超過50μl

2. 擴增產物在電泳分析時沒有條帶或條帶很淺

1)常見的原因在于您的反應體系是PCR的反應體系而不是RT-PCR的反應體系

3) 與反應起始時RNA的總量及純度有關

4) 建議在試驗中加入對照RNA

5) 鏈的反應產物在進行PCR擴增時，在總的反應體系中的含量不要超過1/10

6) 建議用Oligo(dT)或隨機引物代替基因特異性引物（GSP）用于鏈合成。由于RNA模板存在二級結構，如環狀結果，有可能導致GSP無法與模板退火；或SSⅡ反轉錄酶無法從此引物進行有效延伸。

7) 目的mRNA中含有強的轉錄中止位點，可以試用以下方法解決：

a. 將鏈的反應溫度提高至50℃。

b. 使用隨機六聚體代替Oligo(dT)進行鏈反應。