艾美耳球蟲屬通用探針法熒光定量PCR試劑盒注意事項

艾美耳球蟲屬通用探針法熒光定量PCR試劑盒注意事項：
建議加樣順序是陰性質控品、待檢樣本、陽性質控品。4. PCR擴增（擴增區）
1)     儀器設置（以ABI Prism 7500為例）
將PCR反應管放入PCR儀內，按照對應順序設置陰性質控品(NTC)、陽性質控品(Standard)及待檢樣本(Unknown)。Reporter Dye為FAM，Quencher Dye為None，參比染料(Passive Reference)為None。
2 ）   擴增程序

40Cycles
50℃10min
95℃3min
95℃10sec
60℃1min
60℃采集熒光信號，反應體系為25 μl。

樣品 RNA 的制備

1. 如果有N個樣品，*設置N+2個提取，多出的一個是PC（樣品制備陽性對照），一個是 NC（樣品制備陰性對照）。可以用10μL陽性對照的10000倍稀釋液再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此作為PC。另外用水作為NC。

2. 用自選方法純化樣品的RNA，本試劑盒跟市場上大多數病毒RNA提取試劑盒兼容。也以選購本公司的柱式病毒RNAout。本試劑盒免費贈送20次免RNA提取的核酸釋放劑試用裝，該釋放劑的裂解液可以直接作為RT-PCR模板，省略了RNA提取步驟。