酶免疫（ELISA）技術(shù)的發(fā)展

酶免疫技術(shù)的發(fā)展

酶免疫測(cè)定具有高度敏感性、特異性，而且它的試劑比較穩(wěn)定，操作簡(jiǎn)單且無放射性危害，特別是商品試劑盒和自動(dòng)化儀器的應(yīng)用，使其成為一種適用于各級(jí)檢驗(yàn)部門的免疫標(biāo)記技術(shù)。隨著檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)的不斷發(fā)展，酶免疫測(cè)定的方法、技術(shù)也得到發(fā)展和更新，斑點(diǎn)-ELISA、發(fā)光酶免疫測(cè)定、免疫印跡法、BAS-酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)等方法不斷得到應(yīng)用。

（一）斑點(diǎn)-ELISA

斑點(diǎn)-ELISA的原理與ELISA的區(qū)別在于用對(duì)蛋白質(zhì)有*吸附力的硝酸纖維素膜代替塑料制品作為固相載體，酶作用底物后在硝酸纖維素膜上形成有色沉淀而使膜著色。它的靈敏度較一般ELISA高6～8倍、可達(dá)ng水平，試劑用量小，不需其它設(shè)備條件。

（二）免疫印跡法

免疫印跡法是將電泳與ELISA結(jié)合起來的一種方法。它先經(jīng)十二烷基磺酸鈉-聚苯烯酰胺凝膠電泳將樣品進(jìn)行分離，通過轉(zhuǎn)印將被分離的各區(qū)帶原位轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜上，然后把印有蛋白質(zhì)條帶的膜當(dāng)成包被抗原的固相載體，做酶免疫測(cè)定。所以它的方法分為電泳、轉(zhuǎn)印、酶免疫測(cè)定三個(gè)階段。免疫印跡法結(jié)合了電泳的高分辨率和酶免疫測(cè)定的高敏感性和特異性，是一種能用于分析樣品組分的免疫學(xué)測(cè)定方法。

（三）發(fā)光酶免疫測(cè)定

發(fā)光酶免疫測(cè)定與一般EIA的區(qū)別是酶所催化的底物是發(fā)光劑。產(chǎn)物不是一般EIA的有色物質(zhì)，而是發(fā)光產(chǎn)物，所發(fā)出的光可用特定的儀器測(cè)定。常用的酶是HRP和AP，HRP的發(fā)光底物有魯米諾及衍生物、對(duì)-羥基苯乙酸；AP的底物為3-（2--螺旋金剛烷）-4-甲氧基-（3-磷酸氧基）-苯基-1，2-二氧乙烷和4-甲基傘形酮磷酸鹽。

（四）BAS-酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)

BAS-酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)是將生物素-親和素（BAS）放大系統(tǒng)與ELISA結(jié)合起來的一種技術(shù)。生物素（B）是一種小分子的生長(zhǎng)因子，有兩個(gè)環(huán)狀結(jié)構(gòu)，其中一個(gè)可以和親和素結(jié)合，另一個(gè)可以和包括酶、抗原（抗體）的多種物質(zhì)結(jié)合。親和素（A）又稱卵白素，有4個(gè)亞基，都可與生物素穩(wěn)定結(jié)合，此為放大系統(tǒng)的關(guān)鍵，即有1個(gè)親和素就能結(jié)合4個(gè)生物素，親和素也可被酶標(biāo)記。