影響人正常組織細胞因子檢測準確度和特異性的因素分析

影響人正常組織細胞因子檢測準確度和特異性的因素有:(1)抗體:單抗的表位識別;(2)細胞因子:多種分子形式，結(jié)合蛋白復(fù)合物、抑制劑和可溶性受體復(fù)合物;(3)血漿基質(zhì):干擾抗體，異嗜性抗體和類風濕因子;(4)標準:重組參考物質(zhì)可能不顯示與樣品平行的劑量———反應(yīng)曲線。

細胞因子結(jié)合蛋白 已知IL-1β、TNF-α和IL-6能結(jié)合從細胞進入血漿的可溶性受體或特異的拮抗劑。免疫分析法是否能識別這樣的結(jié)合形式幾乎是未知的，但是對TNF的研究得出了一些重要結(jié)論。但使用競爭性免疫分析法時，癌癥病人與敗血癥病人的TNF-α是可被檢測的。而ELISA法由于不能測定TNF-α與P 55 TNF受體的結(jié)合物而無法測定癌癥病人血漿中的TNF-α。

血漿中包含幾種形式的IL-6分子，它們與一些抗血清的作用較弱，缺乏生物學活性并與其它血漿蛋白質(zhì)以及IL-6的可溶性受體組成復(fù)合物。已知IL-6免疫分析法和生物分析測定其在正常血清中的濃度為0或在10～75ng/L范圍，敗血癥病人的IL-6濃度升高到1～2μg/L，腦膜炎病人的IL-6濃度升到200μg/L。然而，May等說明大多數(shù)的檢測方法僅僅測定了低分子量的IL-6，他們采用能識別IL-6高分子量的單抗，測得在正常血清中IL-6的濃度為1～10μg/L，并且在1例骨髓移植后病人的血清樣品中，測得IL-6的濃度為5～10mg/L。

多種分子的形式 一些人正常組織細胞因子的多種分子形式已被充分認識，但是其對細胞因子測定影響的重要性并未得到*的研究。IL-6是一個的例子，它由一個位于第7染色體上，包含5個外顯子的單一多杰基因編碼。其氨基酸序列包括幾個潛在的O-糖基位點，2個N-糖基位點和幾個絲氨酸磷酸化位點。由細菌產(chǎn)生的重組IL-6的相對分子量為21Kd。人成纖維細胞至少分泌6種形式，相對分子量為23～30Kd的IL-6，它們均是糖蛋白，能在敗血癥病人的血漿中被檢測。人內(nèi)皮細胞分泌一種分子量為45Kd的IL-6，它似乎是血漿中的IL-6的主要存在形式。

人血漿中的干擾物質(zhì) 血漿中通常包含有與IgG反應(yīng)的抗體。這些異嗜性的抗體可影響夾心免疫分析法，它們在俘獲抗體和被標記的抗體間形成橋梁，而錯誤地導(dǎo)致高分析值。研究表明，15%～40%的病人樣本中含有能夠干擾檢測的抗體。異嗜性抗體能與鼠、兔和牛血清免疫球蛋白發(fā)生反應(yīng)，在大多數(shù)情況下，它們與牛IgG的結(jié)合Z強。在檢測中，加入正常的非免疫動物血清吸附異嗜性抗體，常能夠消除這種形式的干擾。

類風濕因子是IgM的自身抗體 Hamilton等的研究說明，IgM類風濕因子與鼠IgG的結(jié)合發(fā)生于1%的健康獻血者和31%的類風濕關(guān)節(jié)炎病人。然而，也有研究表明，在9.1%的正常獻血者中發(fā)生了這類結(jié)合。這些抗體可造成與異嗜性抗體*相同的影響，并且他們在對人正常組織細胞因子檢測具有特別意義的類風濕病患者中的濃度*。