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    原代細(xì)胞實驗廢棄的處理方法

    時間:2017/12/14閱讀:273
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    原代細(xì)胞上清
        取細(xì)胞培養(yǎng)上清到離心管,1000×g離心20min,除去細(xì)胞碎片及雜質(zhì),取上清,-20℃或-80℃保存,避免反復(fù)凍融。
    4、  細(xì)胞裂解液
    1)  吸去培養(yǎng)板內(nèi)的培養(yǎng)基,用胰酶消化細(xì)胞,加適量培養(yǎng)基將細(xì)胞從培養(yǎng)板上吹下來。懸浮細(xì)胞可省略。
    2)  收集細(xì)胞懸液,1000×g離心10min,棄去培養(yǎng)基,用預(yù)冷的PBS潤洗3次。
    3)  加入適量的預(yù)冷PBS或細(xì)胞裂解液(臨用前加入蛋白酶抑制劑)重懸細(xì)胞。通常6孔板一個孔的細(xì)胞量需要150~250μL PBS重懸。
    4)  將樣品放入-20℃或-80℃,使樣品冷凍,再放室溫解凍樣品,反復(fù)凍融幾次,使細(xì)胞充分裂解。也可將樣品進(jìn)行超聲破碎,以達(dá)到裂解的目的。
    5)  4℃ 10000×g 離心10min,除去細(xì)胞碎片,取上清,-20℃或-80℃保存,避免反復(fù)凍融。
    組織勻漿液
    1)  將組織樣本用PBS (0.01 [錨點(diǎn)] [錨點(diǎn)] M, PH 7.4) 沖洗,洗去組織表面殘留的血液或雜質(zhì)。
    2)  將組織塊稱重,記錄后剪碎,碎塊應(yīng)盡量小,便于勻漿得更充分
    3)  將組織按一定的比例加入預(yù)冷的PBS(臨用前加入蛋白酶抑制劑)勻漿,勻漿時置于冰上或冰浴中。(通常按組織重量:PBS體積=1:9的比例勻漿,例如1g的組織樣本對應(yīng)9mL的PBS,具體體積可根據(jù)實驗需要適當(dāng)調(diào)整,檢測后計算樣品濃度時應(yīng)乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù))
    4)  原代細(xì)胞吸取勻漿液到離心管,4℃ 5000×g 離心5~10min,取上清,-20℃或-80℃保存,避免反復(fù)凍融。
    6、  尿液、唾液等其他液體生物樣本
    供檢查用    50mg    101109-201001    山梨醇
    供HPLC法    200mg    101116-201001    地塞米松磷酸酯
    供檢查用    50mg    101121-201001    非諾貝特雜質(zhì)Ⅰ
    供檢查用    50mg    101122-201001    非諾貝特雜質(zhì)Ⅱ
    供檢查用    30mg    101124-201001    2-巰基
    供檢查用    100mg    101126-201001    1,3-丙二醇
    供HPLC法    50mg    101128-201001    可的松
    供檢查用    50mg    101132-201001    
    供HPLC含量    20mg    101135-201001    消旋山莨菪堿雜質(zhì)I
    原代細(xì)胞

     

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