細胞株培養小室

1.細胞株復蘇代數靠前的腫瘤細胞，在含有10% FBS的培養基 中預先培養2-3代，待細胞匯合達到80%左右，饑餓處 理18-24小時。
2.準備鋪膠：
a) 4 °C溶EMC膠過夜。
b) 將細胞小室、培養板和槍頭等于4°C 預冷。
c)用無血清的冷培養基稀釋ECM膠至20ug/mL，以5-10ug/cm2的密度加入到細胞小室的上層（按照ECM產品說明書的推薦比例和體積），輕輕搖晃使膠均勻鋪在膜上。以上操作在冰上進行。
d)立即將鋪好ECM膠的細胞小室置于培養板中，于37℃孵育1小時，ECM膠可由液體凝成固體，吸走多余的或者未凝的膠。
3.細胞用PBS清洗一次，EDTA或者0.05%胰酶消化，然后用包含5% BSA的無血清培養基中和，1500rpm離心5-10min。
4.用無血清培養基重懸細胞，調整細胞密度至0.5-2.0 x106cell/ml。
5.取上述200μL細胞液加入小室，下室（培養板）加入900L含有10% FBS的培養基。不同規格的小室和培養板所加的體積不同，具體參考Millicell R 產品說明書以配合24孔板的8μM PET膜Millicell 懸掛式細胞培養小室（cat#MCEP24H48）為例，實驗周期：3-5天
6. 37 ℃孵育24至72小時，依據腫瘤細胞類型而定。
7.孵育結束，小心取出細胞小室，吸掉小室上層培 養液，PBS清洗一遍，70%酒精或者4%多聚甲醛固 定5min，0.5%結晶紫（2%乙醇或PBS溶解）染色 20min，然后進行第8步或者第9步。
8. PBS清洗兩次以去除多余的染料，立即用棉簽擦 去濾膜上層的細胞，自然靜置風干。顯微鏡下觀察 濾膜下層的細胞，隨機選取不同的視野計數并算平均值。
9. 結晶紫溶解濾膜下層細胞株，然后用33%醋酸脫色， 將結晶紫*洗脫下來，洗脫液可在酶標儀上570 nm讀取OD值。這種方法可以避免視野下細。
20mg/支    "分子式：  C30H52O4 
分子量：  476 
"    20(R)原人參三醇    20(R)Protopanaxatriol
        雪膽素甲    
        雪膽素乙    
20mg/支    479-91-4    蔓荊子黃素    Vitexicarpin
        龍血素B    
10mg/支    102036-29-3    原蘇木素B    Protosappanin B
        辛夷脂素    
20mg/支    13476-25-0    烏藥醚內酯    Linderane
20mg/支    528-48-3    漆黃素    Fisetin
        苦玄參苷IA    
20mg/支    1415-73-2    蘆薈苷    Aloin
細胞株