微載體培養操作要點分析

1.細胞系培養初期：保證培養基與微球體處于穩定的PH與溫度水平，接種細胞(對數生長期，而非穩定期)至終體積1/3的培養液中，以增加細胞與微載體接觸的機會。不同的微載體所用濃度及接種細胞密度是不同的。常使用2-3g/L的微載體含量，更高的微載體濃度需要控制環境或經常換液。

2.貼壁階段(3-8d)后，緩慢加入培養液至工作體積，并且增加攪拌速度保證*均質混合。

3.培養維持期：進行細胞計數(胞核計數)、葡萄糖測定及細胞形態鏡檢。隨意細胞系增殖，微球變得越來越重，需增加攪拌速率。經過3d左右，培養液開始呈酸性，需換液：停止攪拌，讓微珠沉淀5min，棄掉適宜體積的培養液，緩慢加入新鮮培養液(37℃)，重新開始攪拌。

4.收獲細胞：首先排干培養液，至少用緩沖液漂洗1遍，然后加入相應的酶，快速攪拌(75-125r/min)20-30min。然后解離收集細胞及其產品。

5.微載體培養的放大：可以通過增加微載體的含量或培養體積進行放大。使用異倍體或原代細胞系培養疫苗、干擾素，已被放大至4000L以上。