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    Bcl-2 試劑盒

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      上海邦景實業(yè)有限公司
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           Bcl-2 試劑盒

    該試劑盒以 HRP 標(biāo)記的鏈霉親和素復(fù)合物(HRP Streptavidin Conjugate,
    HRP-SA)為基礎(chǔ),可用于檢測細(xì)胞、組織內(nèi)的特異性 B 細(xì)胞淋巴瘤因子 2(Bcl-2)
    抗原。該試劑盒具有靈敏度高、特異性強、定性定位準(zhǔn)確、背景清晰。在所用的
    B 細(xì)胞淋巴瘤因子 2(Bcl-2)一抗與相應(yīng)靶抗原結(jié)合后,用生物化二抗與一抗特異
    性結(jié)合,后加入 HRP-SA,形成抗原—特異一抗—生物素化二抗—HRP-SA 復(fù)合
    物,顯微鏡下觀察成像。 石蠟包埋組織切片免疫染色

    實驗步驟(建議方案): 
    石蠟包埋組織切片 3~4μm 厚度 
    1.烤片: 將待做切片置于切片架上,于 60℃恒溫烤箱中至少烤 1 hr; 
    2.脫蠟: 切片放入盛有二甲苯的容器中脫蠟 3 次(即二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ),每次
    10 min; 
    3.水化: 切片經(jīng)下行酒精水化,無水乙醇 5min,95%乙醇 2 次(每次 2min),85%
    乙醇 2 min;75%乙醇 2min,自來水沖洗,ddH2O 洗 2×2min; 
    4.抗原修復(fù): 根據(jù)抗體說明書推薦方法進行抗原修復(fù),常采用高壓、微波(溫
    度達到 98~100℃)或酶消化修復(fù)法,室溫自然冷卻,自來水沖洗,ddH2O 洗 2×
    2min,TBS 洗滌(2×2min)(具體修復(fù)方法見附 1)* 注:有些抗原勿需修復(fù),
    直接進入第 5 步封閉。 
    5.封閉: 滴加試劑 B,37℃濕盒孵育 30 min; 
    6.加一抗:滴加用試劑 C(即用型一抗),37℃濕盒孵育 2 hr 或 4℃過夜; 
    7.洗滌: TBS-T 洗滌(3×5 min); 
    8.封閉: 滴加試劑 B,37℃濕盒孵育 10 min; 
    9.加二抗: 滴加用抗體稀釋液稀釋的生物素化二抗(試劑 D),37℃濕盒中孵育
    30 min; 
    10.洗滌: TBS-T 洗滌(3×5 min); 
    11.封閉: 滴加試劑 Tween 20,37℃濕盒孵育封閉 20 min; 
    12.加 HRP-SA: 滴加用試劑 C 稀釋的試劑 E(1:50~200,終濃度 5~20 nM),37
    ℃濕盒中孵育 30 min; 
    13.洗滌: TBS-T 洗滌(3×5 min),TBS 洗滌(2×5 min); 
    14.顯色:應(yīng)用 DAB 溶液(試劑 F)顯色; 
    15.復(fù)染:自來水充分沖洗,復(fù)染,脫水,透明; 

     


    16.封片: 待組織標(biāo)本干后,用試劑緩沖甘油封固劑封片; 
    17.觀察成像: 顯微鏡下觀察成像。 

    試劑盒所含試劑: 

    試劑 A 通透液:0.1% Triton-X 100   10 mL(選用) 
    試劑 B 2 瓶封閉緩沖液(封閉用) 10ml/瓶 
    試劑 C (*分裝)已稀釋的即用型 bcl-2 一抗(2.5ml) 
    試劑 D (*分裝)生物素化羊抗兔 IgG 1 支 
    (濃度 1.5 mg/mL,稀釋比為 1:300~1:500)50 μL+抗體稀釋液 20ml 
    試劑 E  HRP-SA 復(fù)合物 1 支(濃度 1 μM,稀釋比 1:50~1:200)100 μL 
    試劑 F  DAB 顯色液 5ml 
    用戶自備試劑: 
    1. 10mM TBS(pH7.2~7.4) 
    三羥基氨基甲烷 1.21g 
     

    加蒸餾水 800mL,濃鹽酸調(diào) pH 值至 7.2~7.4,后定容至 1000mL 
    TBS-T:TBS+Tween 20(0.05%體積比) 
    2.抗原修復(fù)液(依檢測抗原不同而選擇不同的修復(fù)液) 
    10mM pH6.0 檸檬酸緩沖液 
    檸檬酸 0.38g 
    檸檬酸三鈉 2.45g 
    加蒸餾水 900mL,濃鹽酸調(diào) pH 值至 6.0,后定容至 1000mL 
    或:0.5M EDTA 修復(fù)液(pH8.0) 
    EDTA·2H2O 186.1g 
    檸檬酸三鈉 2.45g 
    加蒸餾水 700mL,用 10mM NaOH 調(diào) pH 值至 8.0,后定容至 1000Ml 
    3. 緩沖甘油封固劑 10 mL 
    4. Tween 20 5 mL 

     

     


    石蠟包埋組織切片免疫染色

    實驗步驟(建議方案): 
    石蠟包埋組織切片 3~4μm 厚度 
    1.烤片: 將待做切片置于切片架上,于 60℃恒溫烤箱中至少烤 1 hr; 
    2.脫蠟: 切片放入盛有二甲苯的容器中脫蠟 3 次(即二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ),每次
    10 min; 
    3.水化: 切片經(jīng)下行酒精水化,無水乙醇 5min,95%乙醇 2 次(每次 2min),85%
    乙醇 2 min;75%乙醇 2min,自來水沖洗,ddH2O 洗 2×2min; 
    4.抗原修復(fù): 根據(jù)抗體說明書推薦方法進行抗原修復(fù),常采用高壓、微波(溫
    度達到 98~100℃)或酶消化修復(fù)法,室溫自然冷卻,自來水沖洗,ddH2O 洗 2×
    2min,TBS 洗滌(2×2min)(具體修復(fù)方法見附 1)* 注:有些抗原勿需修復(fù),
    直接進入第 5 步封閉。 
    5.封閉: 滴加試劑 B,37℃濕盒孵育 30 min; 
    6.加一抗:滴加用試劑 C(即用型一抗),37℃濕盒孵育 2 hr 或 4℃過夜; 
    7.洗滌: TBS-T 洗滌(3×5 min); 
    8.封閉: 滴加試劑 B,37℃濕盒孵育 10 min; 
    9.加二抗: 滴加用抗體稀釋液稀釋的生物素化二抗(試劑 D),37℃濕盒中孵育
    30 min; 
    10.洗滌: TBS-T 洗滌(3×5 min); 
    11.封閉: 滴加試劑 Tween 20,37℃濕盒孵育封閉 20 min; 
    12.加 HRP-SA: 滴加用試劑 C 稀釋的試劑 E(1:50~200,終濃度 5~20 nM),37
    ℃濕盒中孵育 30 min; 
    13.洗滌: TBS-T 洗滌(3×5 min),TBS 洗滌(2×5 min); 
    14.顯色:應(yīng)用 DAB 溶液(試劑 F)顯色; 
    15.復(fù)染:自來水充分沖洗,復(fù)染,脫水,透明; 

     


    16.封片: 待組織標(biāo)本干后,用試劑緩沖甘油封固劑封片; 
    17.觀察成像: 顯微鏡下觀察成像。 
    注意事項: 
    1. 修復(fù)后緩沖液須自然冷卻,自來水沖洗后方能把切片取出,驟冷有可能導(dǎo)致
    結(jié)晶或抗原封閉。 
    2. 緩沖液的量必須保證所有切片都能浸泡到,用過的檸檬酸緩沖液不能反復(fù)使
    用。 
    3. 若試劑為微量濃縮液,用前應(yīng)低速離心,將內(nèi)蓋和管壁附著的溶液離到底部。 
    4. 封片前一定要換用 TBS 充分洗滌,以便洗去組織上殘留的 Tween 20,否則會
    影響結(jié)果觀察。 
    5. 如須復(fù)染細(xì)胞核,則在封片前復(fù)染或直接采用含有染核試劑的封片劑進行封
    片。 

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