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細(xì)胞凍存實驗步驟：
1. 制備凍存液，凍存液比例：本實驗室采用70%基礎(chǔ)培養(yǎng)基+20%FBS+10%DMSO，不同實驗室及不同細(xì)胞可能略有差異，也可采用55%基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO；
2. 取形態(tài)良好，處于對數(shù)生長期的細(xì)胞，對其消化、離心 (1500rpm離心8min)、計數(shù)；
3. 根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入對應(yīng)的凍存液，使細(xì)胞密度維持在300-500w/mL；
4. 小心用鑷子打開凍存管管蓋，每管分裝1-1.5mL含細(xì)胞的凍存液，擰緊蓋管，做好標(biāo)記。
5. 分裝好的凍存管轉(zhuǎn)入程序降溫盒后直接放-80℃過夜；
6. 若沒有程序降溫盒，則按下列順序依次降溫：室溫→4℃20min→-20℃30min→-80℃過夜，注意轉(zhuǎn)移過程中要保冷，避免產(chǎn)生溫差或凍存管融化；
7. 從-80℃冰箱取出凍存管迅速轉(zhuǎn)移到液氮長期保存。
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