細胞復蘇操作流程

細胞復蘇是指將凍存在液氮里邊或者-80℃冰箱中的細胞解凍，再培養(yǎng)傳代。細胞復蘇應采用快速融化的方法，這樣的目的是為了讓細胞外結晶在很短的時間內融化，從而避免慢悠悠的融化，使得水分滲入細胞內再結晶，從而對細胞再次造成傷害，從而影響細胞的存活率。

細胞復蘇操作流程：

1：細胞是凍在-80℃的環(huán)境里面的，所以拿出來后，應該盡快去37℃水浴鍋里解凍（我一般是放在PE手套里面，然后在37攝氏度的水域上快速融化。）這一步的操作不要超過一分鐘！

2：用預熱的培養(yǎng)基稀釋凍存的細胞（這步我會把融化的凍存液加入到15ml的管子里，加入3ml的預熱的培養(yǎng)液，在超凈臺里完成）

3：離心200g 5-10min，具體的離心的時間不同的細胞略有不同得具體得看培養(yǎng)的protocol

4：在離心以后，倒掉上清（因為凍存液里用DMSO, 它的作用是在凍存細胞時加入，加入的量大概是總體積的10%，起到防凍劑的作用，防止冷凍過程中細胞內形成冰晶。）

5：用預熱的培養(yǎng)液重懸細胞（根據(jù)培養(yǎng)的細胞皿的體積調整，我參照了GM12878,K562的培養(yǎng)protocol，剛開始的細胞密度不要超過10^6 /ML，但是細胞的密度也別太稀了，要不然長的會不好)

6：放到37℃，5%的二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)細胞。

PS：在看細胞凍存和復蘇的時候，有一個詞叫做“慢凍快融"，所以在解凍細胞的時候，在加入預熱的培養(yǎng)基洗細胞之前，操作盡量的快，減少DMSO對細胞的傷害。我的凍存液的配方是：90%的FBS+10%的DMSO，凍存效果沒問題！