聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）標(biāo)準(zhǔn)的三步驟詳述

PCR全稱(chēng)為聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，是一種用于放大擴(kuò)增特定的DNA片段的分子生物學(xué)技術(shù)。

標(biāo)準(zhǔn)的PCR過(guò)程分為三步：

第一步，DNA變性（90℃-96℃）雙鏈DNA在高溫作用下，氫鍵斷裂，形成單鏈DNA。

模板DNA經(jīng)加熱至94℃左右一定時(shí)間后，使模板DNA雙鏈或經(jīng)PCR擴(kuò)增形成的雙鏈DNA解離，使之成為單鏈，以便它與引物結(jié)合，為下輪反應(yīng)做準(zhǔn)備；

第二步，退火（60℃-65℃）溫度降低，引物與DNA模板結(jié)合，形成局部雙鏈。

模板DNA與引物的退火(復(fù)性)：模板DNA經(jīng)加熱變性成單鏈后，溫度降至55℃左右，引物與模板DNA單鏈的互補(bǔ)序列配對(duì)結(jié)合；

第三步，延伸（70℃-75℃）在Taq酶的作用下，以dNTP為原料，從引物的3′端開(kāi)始以從5′到3′端的方向延伸，合成與模板互補(bǔ)的DNA鏈。

DNA模板--引物結(jié)合物在Taq酶的作用下，以dNTP為反應(yīng)原料，靶序列為模板，按堿基配對(duì)與半保留復(fù)制原理，合成一條新的與模板DNA 鏈互補(bǔ)的半保留復(fù)制鏈。

重復(fù)循環(huán)變性--退火--延伸三過(guò)程，就可獲得更多的“半保留復(fù)制鏈"，而且這種新鏈又可成為下次循環(huán)的模板。每完成一個(gè)循環(huán)需2～4分鐘， 2～3小時(shí)就能將待擴(kuò)目的基因擴(kuò)增放大幾百萬(wàn)倍。