細(xì)胞凍存的注意事項(xiàng)

細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，考慮到細(xì)胞株傳代次數(shù)逐漸增加后，細(xì)胞變異的可能性將增大，繼續(xù)培養(yǎng)的話細(xì)胞株可能會(huì)出現(xiàn)老化、狀態(tài)下降、丟失一些該細(xì)胞的特性的現(xiàn)象，對(duì)后續(xù)實(shí)驗(yàn)造成影響；

此外，如果該細(xì)胞株特別珍貴，屬于實(shí)驗(yàn)室重要資源，對(duì)細(xì)胞進(jìn)行大規(guī)模的保存，能有效降低課題項(xiàng)目執(zhí)行的風(fēng)險(xiǎn);

最后，就是常見(jiàn)的風(fēng)險(xiǎn)規(guī)避問(wèn)題，正所謂人有失手、馬有失蹄，再熟練的實(shí)驗(yàn)操作者、再厲害的實(shí)驗(yàn)設(shè)備也是有出問(wèn)題的可能，一旦出問(wèn)題，意味著細(xì)胞資源的損失。

基于以上幾點(diǎn)，細(xì)胞凍存對(duì)于一個(gè)實(shí)驗(yàn)室或個(gè)人來(lái)說(shuō)，是非常必要的操作。

細(xì)胞凍存的注意事項(xiàng)：

1 在凍存之前，確保細(xì)胞狀態(tài)良好。包括：細(xì)胞生長(zhǎng)密度符合上述規(guī)定、細(xì)胞無(wú)污染、細(xì)胞形態(tài)良好沒(méi)有變異。

2 DMSO可以溶解部分濾膜，如果要進(jìn)行過(guò)濾，應(yīng)該選擇不會(huì)被DMSO降解的濾器，并且操作時(shí)務(wù)必帶手套。

3 凍存管的管蓋并不是擰得越緊越好，因?yàn)楣苌w內(nèi)有O型橡膠圈，擰得太緊會(huì)讓其變形，造成泄漏。當(dāng)然，太松也會(huì)泄漏。

4 細(xì)胞凍存的密度應(yīng)該要比傳代時(shí)的密度要高得多，假如傳代時(shí)的密度是1X10^?5/mL，那么凍存時(shí)可以將密度提高到100倍。

等到了復(fù)蘇后，再將密度稀釋為1/20也依然能保持較高的生長(zhǎng)密度，但與此同時(shí)，殘留的DMSO對(duì)細(xì)胞的影響則會(huì)大大降低。

5 凍存應(yīng)遵循慢凍，復(fù)蘇則相反，應(yīng)快速升溫。慢凍的原因是為了避免降溫時(shí)，細(xì)胞內(nèi)的水分還未來(lái)得及脫離細(xì)胞，但卻形成冰晶，對(duì)細(xì)胞造成損傷。

但也要注意，慢凍不等于無(wú)限制的緩慢降溫，因?yàn)樘?，也?huì)促成水分形成冰晶。理想的降溫速度應(yīng)該是1度/分鐘的下降速度。