細胞培養具體步驟

細胞培養也叫細胞克隆技術，在生物學中的正規名詞為細胞培養技術。細胞培養技術可以由一個細胞經過大量培養成為簡單的單細胞或極少分化的多細胞，這是克隆技術必要的環節，而且細胞培養本身就是細胞的克隆。通過細胞培養得到大量的細胞或其代謝產物。

細胞培養具體步驟：

一、復蘇

1.把凍存管從液氮中取出來，立即投入37℃水浴鍋中，輕微搖動(注意防止蓋子不緊致使液體進入凍存管)。液體都融化后(大概1-1.5分鐘)，拿出來噴點酒精放到超凈工作臺里。

2.把上述細胞懸液吸到裝10ml培養基的15ml的離心管中(用培養基把凍存管洗一遍，把粘在壁上的細胞都洗下來)，1000轉離心5分鐘。

3.把上清液倒掉，加1ml培養基把細胞懸浮起來。吸到裝有10ml培養基的10cm培養皿中前后左右輕輕搖動，使培養皿中的細胞均勻分布。

4.標好細胞種類和日期、培養人名字等，放到37℃的5%CO2培養箱中培養，細胞貼壁后換培養基。

5.根據細胞增長速度2-3天換一次培養基。

二、傳代

1.培養皿中的細胞覆蓋率達到80%-90%時要傳代。

2.把原有培養基吸掉.

3.加適當的胰蛋白酶(能覆蓋細胞就行)，消化1-2分鐘。

4.細胞都變圓后加入等體積的含血清的培養基終止消化。

5.用移液槍吹打細胞，讓細胞懸浮起來。

6.把細胞吸到10ml或15ml的離心管中，1000轉離心5分鐘。

7.倒掉上清液，加1-2ml培養基，把細胞都吹起來。

8.根據細胞種類把細胞傳到幾個培養皿中。一般，癌細胞分5個，正常細胞傳3個。繼續培養。

三、凍存

把細胞消化下來并離心(同上)。用配好的凍存液把細胞懸浮起來，分裝到滅菌的凍存管中，靜止幾分鐘，寫明細胞種類，凍存日期。4℃30min，-20℃30min，-80℃過夜，然后放到液氮灌中保存。

凍存液的配制:70%的*培養基+20%FBS+10%DMSO.DMSO要慢慢滴加，邊滴邊搖。