elisa分析檢測試劑盒選用技巧

elisa分析檢測試劑盒選用技巧
1、試劑盒中的稀釋線性及回收率：
（1）稀釋線性一般指樣本稀釋線性，是將樣本梯度稀釋下來，看各稀釋梯度濃度是否成線性；參考樣本稀釋線性可以選擇樣本的*稀釋倍數；
（2）靈敏度：試劑盒能夠檢測到的樣本zui低濃度的能力，如果待檢指標含量很低，需要選擇高靈敏度的ELISA試劑盒；
（3）板間和板內的變異系數（CV%）:反映板內和不同板之間是否均勻，CV%一般小于10% 比較好。
（4）稀釋線性也有做加標稀釋線性的情況，加標稀釋線性是將標準品加入樣本中測定加入的標準品濃度測定是否準確；同樣也是確定待測樣本稀釋倍數的參考指標。一般線性和回收率的范圍在80%-120%比較合適； 
2、試劑盒的檢測范圍：也就是標曲范圍，特別要注意待測樣本濃度是否落在標曲范圍內，對于濃度很高的樣本，可以先進行預實驗摸索到比較好的稀釋倍數后再大量測定樣本。 
3、試劑盒的有效期：試劑盒的有效期一般是半年至一年，樣本準備時間需要考慮到試劑盒的有效期。
二、鵝ELISA試劑盒使用技巧
1、仔細閱讀說明書，熟悉整個流程，推薦畫出簡要步驟圖；提前準備試劑，比如常見20X洗滌液是濃縮液，需要用超純水提前稀釋準備好。一般的檢測抗體和酶標二抗需要用對應的稀釋液稀釋至工作濃度。
2、不同批次的試劑不要混用，檢查各組分的有效期。
3、樣本的準備：盡量使用新鮮樣本，不使用有溶血，被細菌污染、標本保存時間過長和標本凝固不全的樣本。ELISA檢測宜采集新鮮標本，如不能立即測定，5天之內應4℃保存，對于1周后檢測的樣本應低溫凍存；做好分裝，長時間凍存的樣本避免反復凍融。
4、預包被的酶標板條和各試劑組份需要室溫平衡30 min以上，這樣做的目的能使反應微孔內的溫度較快地達到所需溫度，預防后續實驗中由于孵育溫度或是時間不夠充分，而將一些弱陽性樣本不能檢出。
5、待測樣本加樣：待檢樣本過多時，建議分批操作；需要稀釋的樣本提前做好稀釋，注意選對合適稀釋液；控制好加樣時間，避免加樣費時過長造成誤差；注意加樣角度，垂直加入孔底，不要接觸孔壁, 做到一份樣本一個移液頭，防止交叉污染。 
6、溫育和洗板：溫育時間和溫度一般根據試劑盒的說明書進行選擇。溫育時可以采用水浴或者濕盒孵育,避免“邊緣效應”。①手工洗板時，拍板時要垂直，避免交叉污染，用力不能過猛，防止抗原抗體復合物脫離；②洗板機洗板時應經常檢查沖洗頭是否通暢。
7、顯色：市售ELISA 試劑盒中，一般是以四甲基聯苯胺(TMB)為底物的顯色液，反應條件為37℃或室溫反應15～30 min。顯色反應需要避光。
8、讀數和數據分析：終止后讀取結果盡量在15min內完成，讀取OD值時酶標儀需先預熱15～30 min再進行。數據分析一般用四參數和直線擬合法，選擇哪種擬合方式，可以依據標曲的相關系數（R2）來確定，R2一般需要大于0.99。