elisa試劑盒 血清學(xué)方法瓊脂擴(kuò)散試驗操作原理

elisa分析檢測試劑盒瓊脂擴(kuò)散試驗，又稱免疫擴(kuò)散反應(yīng)或凝膠沉淀反應(yīng)，基本原理是可溶性抗原和相應(yīng)抗體在含有電解質(zhì)的瓊脂凝膠中擴(kuò)散相遇，特異性地結(jié)合形成肉眼可見的線狀沉淀物的一種免疫血清學(xué)技術(shù)。
由于瓊脂擴(kuò)散試驗的操作簡便，不需要特殊設(shè)備，且有較好的特異性和檢出率，故已成為一種廣泛應(yīng)用的免疫學(xué)技術(shù)。在動物病毒學(xué)中廣泛用于檢測病毒抗原和毒型鑒定。應(yīng)當(dāng)指出，由于家禽免疫球蛋白的特殊性，瓊脂凝膠中的NaCl含量應(yīng)為8％，而不是通常的0.85％，使用這樣的濃度可取得更好的結(jié)果。

1.操作方法
(1)抗原及抗體分別加入相應(yīng)孔中，每孔加入50ul。
(2)加好的板放入濕盒中加蓋后置37℃溫箱中24小時觀察結(jié)果。
2.判定
(1)強(qiáng)陽性(＋＋＋)：在被檢血清孔與抗原孔之間有明顯的沉淀線，并與標(biāo)準(zhǔn)陽性血清的沉淀線末端互相連接者。
(2)陽性(＋＋)：在被檢血清孔與抗原孔之間有較弱的沉淀線，并與標(biāo)準(zhǔn)陽性血清的沉淀線末端互相連接者。
(3)弱陽性(＋)：標(biāo)準(zhǔn)陽性血清孔與抗原孔之間的沉淀線末端向被檢血清孔內(nèi)側(cè)彎曲者。
(4)疑似(±)：標(biāo)準(zhǔn)陽性血清孔與抗原孔之間出現(xiàn)的沉淀線末端向被檢血清孔內(nèi)側(cè)偏彎或微彎者。
(5)陰性(－)：被檢血清孔與抗原孔之間不形成沉淀線，或者標(biāo)準(zhǔn)陽性血清的沉淀線向相鄰的被檢血清孔直伸或向外側(cè)偏彎者，判定為陰性。被檢血清孔與抗原孔間出現(xiàn)的沉淀線與標(biāo)準(zhǔn)陽性血清的沉淀線呈現(xiàn)交叉現(xiàn)象時，為非特異反應(yīng)，判為陰性。
3．注意事項
(1)瓊脂質(zhì)量影響試驗結(jié)果，一般應(yīng)用精制瓊脂粉或瓊脂糖配制瓊脂凝膠板。
(2)孔徑大、孔距小，較易出現(xiàn)沉淀線，但孔距太小，不易鑒別兩條以上的沉淀線，故在病毒抗原分析時，孔距不宜太小。
(3)一般認(rèn)為37℃感作比較容易出沉淀線，但對易于失效的病毒抗原，可置室溫或4℃感作。
(4)抗原、抗體的濃度越高，出現(xiàn)沉淀線的時間越快，故必要時，可將抗原、抗體先作適當(dāng)?shù)臐饪s處理。
4．染色
為提高沉淀線的可見度，或需長期保存標(biāo)本時，可按下述方法處理標(biāo)本并染色。
(1)漂洗：將瓊脂板用綢布包裹后，浸泡于鹽水中12小時，其間換液2～3次，再以蒸餾水浸泡5～6小時，其間換液2次，借以除去未結(jié)合的蛋白質(zhì)。
(2)固定：解開綢布，將瓊脂板浸入70％酒精配制的2％醋酸溶液中固定1小時。
(3)染色：首先配制醋酸-甲醇液，即取10ml冰醋酸、20ml水和70ml甲醇混合。再取氨基黑的10B0.1g溶于100ml醋酸-甲醇液中，即為氨基黑染色液。
將固定好的瓊脂擴(kuò)散板浸泡于氨基黑染色液中10分鐘，再用醋酸-甲醇液洗去底色，干燥后即可長期保存。
elisa分析檢測試劑盒瓊脂凝膠的含水量極大，常用瓊脂凝膠(1％～1.2％)含水98％以上，可使分子量20萬以下的大分子物質(zhì)自由通過。由于大多數(shù)抗原和抗體的分子量都在20萬以下，所以能在瓊脂凝膠中自由擴(kuò)散。當(dāng)抗原和抗體相應(yīng)且比例適當(dāng)，兩者相遇就會出現(xiàn)一條沉淀線。一對抗原和抗體，形成一條沉淀線，故可應(yīng)用瓊脂擴(kuò)散試驗鑒定抗原和抗體成分、抗體的純度、抗原或抗體的相對效價等。
    1,2,3,4-四氫-1-萘胺    N-異丙基-4哌啶甲酸
二月桂酸二正辛基錫    4-氟-2-(三氟甲基)苯酚    2-溴-6-氰基吡啶
2-氟-3-溴-5-甲基吡啶    3,5-二甲氧基肉桂酸    2-三氟甲基苯磺酰胺
3-溴-2-硝基吡啶    (R)-2-BOC-氨甲基吡咯烷    4-羥基-6,7-二甲氧基喹啉
2-氨基-3-硝基-5-氟吡啶     5-丙氧基-4-甲基-1,2,4-三唑啉酮
2,6-二氟-3-硝基苯胺    組胺磷酸鹽    1,4-苯二甲硫醇
4-甲基-5-羥基呋喃-2-酮    2-氯*酮    4-氟苯甲脒鹽酸鹽
7-羥基-6-甲氧基-3,4-二氫異喹啉    環(huán)己甲酰氯    3-甲基-4-異丙基苯酚
4-氟鄰苯二甲酸酐    Fmoc-L-3-氰基苯丙氨酸    2-氟-5-硝基苯乙酸
尼可地爾    4-甲氧基-2-氟苯胺鹽酸鹽    1-((氰基-1-甲基乙基)偶氮)甲酰胺
4-氯-3,5-二硝基苯甲酸    3-(4-甲氧苯基)-3-羰基丙酸甲酯    3-苯基吡啶
4-(4-哌啶基)嗎啉    L-甲基多巴    2-甲基煙酸甲酯
1,1-二乙基己烷    3-氯-4-甲基苯甲腈    4-(4-氟苯甲酰基)丁酸
2,3-二氯苯肼鹽酸鹽    氧化-4-甲基嗎啉一水合物    乙酰丙酮亞鐵
2-氯-3-硝基苯甲醚    2-氟-4-碘煙酸    丙二醇二乙酸酯
對甲基苯甲醇草酸二酯    3,4-二氨基苯甲腈    4-環(huán)戊基嗎啉
3-溴噻吩-2-甲酸    3-乙?；脚鹚?nbsp;   2-(2-氯乙氧基)乙酸甲酯

elisa分析檢測試劑盒