DH10Bac 感受態(tài)細胞100ul*50包裝 返回列表頁

細胞的種類：
*種：
DH10Bac 感受態(tài)細胞100ul*50包裝是凍存產(chǎn)品，由液氮直接拿出，干冰運輸給客戶。一般不推薦這種，也較少使用這種方式，因為復蘇手法對于細胞狀態(tài)影響較大，一旦細胞狀態(tài)不好，很難說是細胞自身不行，還是復蘇沒操作好；另外溫度對細胞、基因功能狀態(tài)影響很大，也不是細胞儲存的方式，快遞時間也很難控制，多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量；干冰運輸需要額外添加400元的運費(順豐)。
第二種：
是我們復蘇好細胞，QC通過后，T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運輸給客戶，排除復蘇造成影響，常溫運輸也對細胞影響也不大，只需加25元運費(順豐)。
質(zhì)量保證：我們的細胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實驗室擴增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測，進口來源，保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細菌、真菌、支原體污染。的凍存是細胞培養(yǎng)的基本操作，不同的實驗室采用的方法略有差異，但是都會遵循慢凍速溶的宗旨。

實驗報告：
一、DH10Bac 感受態(tài)細胞100ul*50包裝分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，后將組織剪成1mm3左右大小；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗（Abbioscience公司），然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗（嘉美生物公司）， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，后在倒置熒光顯微鏡(Leica公司)下觀察圖像并拍照。
細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．DH10Bac 感受態(tài)細胞100ul*50包裝培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
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*  纖維粘連蛋白-牛源　英文名稱：BPF

*  I 型膠原細胞檢測試劑盒　英文名稱：Col

*  纖維母細胞粘附檢測試劑盒　英文名稱：Fibro

*  MTT細胞活力和增殖檢測試劑盒　英文名稱：MTT

*  WST-1細胞活力和增殖檢測試劑盒　英文名稱：WST

*  細胞衰老檢測試劑盒　英文名稱：CSA

*  β-半乳糖苷酶比色檢測試劑盒　英文名稱：GalC

角膜上皮細胞培養(yǎng)基　  CEpiCM-prf　　

滋養(yǎng)層細胞培養(yǎng)基　  TM-prf　*　

前脂肪細胞培養(yǎng)基　  PAM-prf　原裝/進口　

前脂肪細胞分化培養(yǎng)基　  PADM-prf　　

人癌細胞，BT-549細胞　*　

人癌細胞，BT474細胞　原裝/進口　

人癌細胞，HS578T細胞　　

人癌細胞，MCF-7細胞細胞系　*　
DH10Bac 感受態(tài)細胞100ul*50包裝Dermokine蛋白檢測試劑盒　規(guī)格：　48T/96T

Desmuslin蛋白檢測試劑盒　規(guī)格：　48T/96T

Diaphanous同源物1檢測試劑盒　規(guī)格：　48T/96T

Dicer酶1檢測試劑盒　規(guī)格：　48T/96T

Dickkopf相關(guān)蛋白1檢測試劑盒　規(guī)格：　48T/96T

Dickkopf相關(guān)蛋白1檢測試劑盒　規(guī)格：　48T/96T

Dickkopf相關(guān)蛋白1檢測試劑盒　規(guī)格：　48T/96T

Dickkopf相關(guān)蛋白2檢測試劑盒　規(guī)格：　48T/96T

Dickkopf相關(guān)蛋白3檢測試劑盒　規(guī)格：　48T/96T

Dickkopf相關(guān)蛋白4檢測試劑盒　規(guī)格：　48T/96T