小鼠腫瘤壞死因子γ（TNF-γ）elisa試劑盒使用原理

小鼠腫瘤壞死因子γ（TNF-γ）試劑盒試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包被小鼠腫瘤壞死因子γ（TNF-γ）捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的小鼠腫瘤壞死因子γ（TNF-γ）呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。
小鼠腫瘤壞死因子γ（TNF-γ）elisa試劑盒樣本處理及要求
1. 血清：全血標本請于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000g離心20分鐘，取上清即可檢測，或將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。
2. 血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑，標本采集后30分鐘內于2 - 8°C 1000g離心20分鐘，或將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。
3. 組織勻漿：用預冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織，去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細胞會影響測量結果），稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應體積的PBS（一般按1:9的重量體積比，比如1g的組織樣品對應9mL的PBS，具體體積可根據實驗需要適當調整，并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑）加入玻璃勻漿器中，于冰上充分研磨。為了進一步裂解組織細胞，可以對勻漿液進行超聲破碎，或反復凍融。*后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘，取上清檢測。
4. 細胞培養物上清或其它生物標本：1000g離心20分鐘，取上清即可檢測，或將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。
小鼠腫瘤壞死因子γ（TNF-γ）elisa試劑盒注：標本溶血會影響*后檢測結果，因此溶血標本不宜進行此項檢測。