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    TSZelisa試劑盒處理和保存方面要考慮以下幾個方面

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    TSZelisa試劑盒處理和保存方面要考慮以下幾個方面
    (1)要注意避免出現(xiàn)嚴(yán)重溶血。血紅蛋白中含有血紅素基團,其有類似過氧化物的活性,因此,在以HRP為標(biāo)記酶的人ELISA檢測試劑盒測定中,如血清標(biāo)本中血紅蛋白濃度較高,則其就很容易在溫育過程中吸附于固相,從而與后面加入的HRP底物反應(yīng)顯色。
    (2)樣本的采集及血清分離中要注意盡量避免細菌污染,一則細菌的生長,其所分泌的一些酶可能會對抗原抗體等蛋白產(chǎn)生分解作用;二則一些細菌的內(nèi)源性酶如大腸桿菌的β-半乳糖苷酶本身會對用相應(yīng)酶作標(biāo)記的測定方法產(chǎn)生非特異性干擾。
    (3)血清標(biāo)本如是以無菌操作分離,則可以在2~8℃下保存一周,如為有菌操作,則建議冰凍保存。樣本的長時間保存,應(yīng)在-70℃以下。
    (4)冰凍保存的血清標(biāo)本須注意避免因停電等造成的反復(fù)凍融。標(biāo)本的反復(fù)凍融所產(chǎn)生的機械剪切力將對標(biāo)本中的蛋白等分子產(chǎn)生破壞作用,從而引起假陰性結(jié)果。此外,人ELISA檢測試劑盒凍融標(biāo)本的混勻亦應(yīng)注意,不要進行劇烈振蕩,反復(fù)顛倒混勻即可。
    (5)標(biāo)本在保存中如出現(xiàn)細菌污染所致的混濁或絮狀物時,應(yīng)離心沉淀后取上清檢測。
    實驗中的操作要點
    1、加樣
    在ELISA中一般有3次加樣步聚,即加標(biāo)本,加酶結(jié)合物,加底物。加樣時應(yīng)將所加物加在LEISA板孔的底部,避免加在孔壁上部,并注意不可濺出,不可產(chǎn)生氣泡。 加標(biāo)本一般用微量加樣器,按規(guī)定的量加入板孔中。每次加標(biāo)本應(yīng)更換吸嘴,以免發(fā)生交叉污染,也可用一次性的定量塑料管加樣。有此測定(如間接法ELISA)需用稀釋的血清,可在試管中按規(guī)定的稀釋度稀釋后再加樣。也可在板孔中加入稀釋液,再在其中加入血清標(biāo)本,然后在微型震蕩器上震蕩1分鐘以保證混和。加酶結(jié)合物應(yīng)用液和底物應(yīng)用液時可用定量多道加液器,使加液過程迅速完成。
    2、標(biāo)本的采取和保存
    可用作ELISA測定的標(biāo)本十分廣泛,體液(如血清)、分泌物(唾液)和排泄物(如尿液、糞便)等均可作標(biāo)本以測定其中某種抗體或抗原成份。有些標(biāo)本可直接進行測定(如血清、尿液),有些則需經(jīng)預(yù)處理(如糞便和某些分泌物)。大部分ELISA檢測均以血清為標(biāo)本。血漿中除尚含有纖維蛋白原和抗凝劑外,其他成份均同等于血清。制備血漿標(biāo)本需借助于抗凝劑,而血清標(biāo)本只要待血清自然凝固、收縮后即可取得。除特殊情況外,在醫(yī)學(xué)檢驗中均以血清作為檢測標(biāo)本。在ELISA中血漿和血清可同等應(yīng)用。血清標(biāo)本可按常規(guī)方法采集,應(yīng)注意避免溶血,紅細胞溶解時會釋放出具有過氧化物酶活性的物質(zhì),以HRP為標(biāo)記的ELISA測定中,溶血標(biāo)本可能會增加非特異性顯色。
    血清標(biāo)本宜在新鮮時檢測。如有細菌污染,菌體中可能含有內(nèi)源性HRP,也會產(chǎn)生假陽性反應(yīng)。如在冰箱中保存過久,其中的可發(fā)生聚合,在間接法ELISA中可使本底加深。一般說來,在5天內(nèi)測定的血清標(biāo)本可放置于4℃,超過一周測定的需低溫冰存。凍結(jié)血清融解后,蛋白質(zhì)局部濃縮,分布不均,應(yīng)充分混勻宜輕緩,避免氣泡,可上下顛倒混和,不要在混勻器上強烈振蕩。混濁或有沉淀的血清標(biāo)本應(yīng)先離心或過濾,澄清后再檢測。反復(fù)凍融會使抗體效價跌落,所以測抗體的血清標(biāo)本如需保存作多次檢測,宜少量分裝冰存。保存血清自采集時就應(yīng)注意無菌操作,也可加入適當(dāng)防腐劑。
    3、試劑的準(zhǔn)備
    按Elisa試劑盒說明書的要求準(zhǔn)備實驗中需用的試劑。ELISA試劑盒ELISA中用的蒸餾水或去離子水,包括用于洗滌的,應(yīng)為新鮮的和高質(zhì)量的。自配的緩沖液應(yīng)用pH計測量較正。從冰箱中取出的試驗用試劑應(yīng)待溫度與室溫平衡后使用。試劑盒中本次試驗不需用的部分應(yīng)及時放回冰箱保存。
    4、保溫
    在ELISA中一般有兩次抗原抗體反應(yīng),即加標(biāo)本和加酶結(jié)合物后。抗原抗體反應(yīng)的完成需要有一定的溫度和時間,這一保溫過程稱為溫育,有人稱之為孵育,在ELISA中似不恰當(dāng)。
    TSZelisa試劑盒牛布魯氏桿菌抗體(IgM)ELISA Kit    英文名:    Bovine brucella antibody(IgM)ELISA kit
    牛布魯氏桿菌抗體(IgG)ELISA Kit    英文名:    Bovine Brucella antibody IgG ELISA kit
    牛補體片斷(C)ELISA Kit    英文名:    Bovine complement fragment ,C ELISA kit
    牛丙二酸單酰輔酶A(malonyl CoA)ELISA Kit    英文名:    Bovine malonyl coenzyme A ELISA kit
    牛丙二醛(MDA)ELISA Kit    英文名:    Bovine Malondialdehyde,MDA ELISA Kit
    牛表皮生長因子(EGF)ELISA Kit    英文名:    Bovine Epithelial growth factor,EGF ELISA Kit
    牛白三烯B4(LT-B4)ELISA Kit    英文名:    Bovine leukotriene B4,LT-B4 ELISA kit
    牛白介素8(IL-8)ELISA Kit    英文名:    Bovine Interleukin 8,IL-8 ELISA Kit
    牛白介素6(IL-6)ELISA Kit    英文名:    Bovine Interleukin 6,IL-6 ELISA Kit
    牛白介素5(IL-5)ELISA Kit    英文名:    Bovine Interleukin 5,IL-5 ELISA Kit
    牛白介素4(IL-4)ELISA Kit    英文名:    Bovine interleukin 4,IL-4 ELISA Kit
    牛白介素2受體(IL-2R)ELISA Kit    英文名:    Bovine Interleukin-2 receptor,IL-2R ELISA kit
    牛白介素22(IL22)ELISA Kit    英文名:    Bovine interleukin 22,IL22 ELISA kit
    牛白介素2(IL-2)ELISA Kit    英文名:    Bovine Interleukin 2,IL-2 ELISA Kit
    牛白介素1β(IL-1β)ELISA Kit    英文名:    Bovine Interleukin 1β,IL- 1β ELISA kit
    牛白介素17(IL-17)ELISA Kit    英文名:    Bovine Interleukin 17,IL-17 ELISA Kit
    牛白介素12(IL-12)ELISA Kit    英文名:    Bovine Interleukin 12,IL-12 ELISA Kit
    牛白介素10(IL-10)ELISA Kit    英文名:    Bovine Interleukin 10,IL-10 ELISA Kit
    牛白介素1(IL-1)ELISA Kit    英文名:    Bovine Interleukin 1,IL-1 ELISA Kit
    牛γ干擾素(IFN-γ)ELISA Kit    英文名:    Bovine Interferon γ ,IFN-γ ELISA Kit
    牛γ氨基丁酸(GABA)ELISA Kit    英文名:    Bovine Gamma-aminobutyric acid,GABA ELISA Kit
    牛β-乳球蛋白(β-LG)(過敏原Bosd5)(LGB)ELISA Kit    英文名:    Bovine beta-lactoglobulin(Beta-LG)(allergen Bosd5)(LGB)ELISA kit
    牛β羥基丁酸脫氫酶(β-HBDH)ELISA Kit    英文名:    Bovine β-Hydroxybutyrate Dehydrogenase,β-HBDH ELISA Kit
    牛β羥丁酸(βOHB)ELISA Kit    英文名:    Bovine Beta-Hydroxybutyric Acid,β-OHB ELISA KitTSZelisa試劑盒

     

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