大鼠elisa試劑盒檢測步驟

大鼠elisa試劑盒檢測步驟：
1. 制備含MMP 底物蛋白的SDS-PAGE 凝膠：推薦分離膠濃度為8%。按照標準程序制備SDSPAGE凝膠。將10 × substrate G 融化，并90 ºC 加熱5 分鐘。分別在濃縮膠和分離膠中額外加入10 × substrate G 并使之稀釋10 倍，混勻后加入過硫酸銨和TEMED，等待凝膠聚合。
2. 待測樣品1:1 稀釋于2 × SDS-PAGE non-reducing buffer （用完后可自行配制：4% SDS, 100 mMTris-Cl pH6.8, 20% glycerol, 0.02% bromophnol blue），混合后直接上樣。切勿加熱變性，并且僅使用不加還原劑的上樣緩沖液。可通過預試驗確定加樣量，使用普通蛋白預染Marker 即可。陽性對照（可選步驟）：可取人、小鼠、大鼠或兔100μl 全血與100μl 2 × SDS-PAGE nonreducingbuffer 等體積混合，取5-15μl 上樣。
3. 低電流恒流電泳，每一塊小膠電流為20 mA/gel。溴酚藍跑出凝膠前沿時結束電泳。
4. 洗滌凝膠：取出凝膠，去除濃縮膠，放入容器內。可先用適量蒸餾水沖洗凝膠，然后加入10 ml1× Buffer A（用蒸餾水稀釋），室溫漂洗凝膠2 × 30 分鐘。中間換液。
5. 孵育：倒掉Buffer A。加入10 ml 1× Buffer B（蒸餾水稀釋），室溫或37ºC 孵育1~5 小時。陽性對照或者血中的MMP 通常37ºC 孵育1 小時即可顯示。如MMP 活性低，應延長孵育時間為10 小時或過夜。
6. 顯色：倒掉Buffer B，加入SDS-PAGE 凝膠蛋白質考馬斯亮藍染色液（操作步驟見SDS-PAGE凝膠蛋白質考馬斯亮藍染色液說明書）。凝膠的大部分區域被深染，在有MMP 條帶的位置不被染色而形成透亮區域。透明區域的位置和范圍指示MMP-2、MMP-9 的大小位置（酶譜）及活性。陽性對照將在66~72 （MMP-2）、92 （MMP-9）、130 （proMMP-9）、225 （proMMP-9） kDa位置出現透明條帶。
大鼠elisa試劑盒兔子胰島素樣生長因子1(IGF-1)ELISA試劑盒    96T/48T    規格：
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兔粒細胞集落刺激因子(G-CSF)ELISA試劑盒    96T/48T    規格：大鼠elisa試劑盒