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    細胞凍存操作過程注意事項

    時間:2024/9/18閱讀:511
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    細胞凍存操作過程注意事項:

    1. 為保持細胞最大存活率,一般都采用慢凍存融的方法。

    2. 凍存物距液氮面越近溫度越低。標準的低凍速度為-1~12/ 分鐘,當溫度下降達-25℃時,下降速度可增至-5~10/ 分鐘,到-100℃時則可迅速凍入液氮中。因此要適當掌握凍存物下降入液氮中的速度,過快能影響細胞內水分透出,太慢則促冰晶形成。

    3. 初次凍存者在下降凍存時,宜先用細木棒伸入罐中探測液面位置,然后需用溫度計與凍存物并行的辦法,以觀測下降凍存物的速度、凍存物與液氮液面距離和溫度三者關系,當已掌握以上各參數和凍存技術熟練后,僅按下降時間和下降距離便可獲理想凍存效果。

    4. 各種細胞對凍存速度的要求也不一樣;上皮細胞和成纖維細胞耐受性可能大些,骨髓干細胞-2~3/ 分鐘合適;胚胎細胞耐受性較小,不宜太快。總之在一開始時,下降速度不能超過-10/ 分鐘。

    5. 用什么防護劑合適和用量多大,要依細胞而定,初代培養細胞用 DMSO 較好,一般細胞可用甘油;用量以較小為好。有人認為人皮膚上皮細胞貯存在 20%-30% 甘油中很好。

    6. 原則上細胞在液氮中可貯存多年,但為妥善起見,凍存一年后,應再復蘇培養一次,然后再繼續凍存。

    7. 將凍存管放入液氮容器或從中取出時,要做好防護工作,以免凍傷

    8. 注意自身的安全,對于來自人源性或病毒感染的細胞株應特別小心。操作過程中,應避免引起氣溶膠的產生,小心有毒性試劑例如 DMSO,并避免尖銳物品傷人等。


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