H9細胞消化液操作說明

操作說明：

1. 將H9全培養基取出并平衡至室溫，取出包被過Matrix的培養皿/瓶，吸去包被液并加入適量全培養基，置于5% CO2的37℃恒溫細胞培養箱中。

2. 吸走待傳代細胞培養皿/瓶中的iPS全培養基，并且加入無鈣鎂的PBS溶液洗一次。

3. 加入0.5mM EDTA傳代工作液使之全覆蓋皿/瓶底。

4. 室溫放置5 ~ 8 min或37℃恒溫細胞培養箱中孵育3 ~ 5 min，顯微鏡下觀察到大部分克隆邊緣開始脫離皿/瓶底，克隆內部大部分細胞間出現間隙但尚未相互分離，肉眼觀察到細胞集落變得不透明且發白，表明細胞消化時間理想。

5. 吸去傳代工作液，即刻加入新鮮的H9全培養基，用移液器扇形吹打培養皿/瓶底，使皿/瓶底貼附的干細胞集落脫落，輕柔緩慢吹吸混勻。

 注：吹吸的力度要輕柔，吹打脫落和吹吸混勻的次數總共不超過10次為宜。吹打過度導致大量單細胞出現是造成細胞分化或死亡的重要原因。

  注：如有少量細胞無法從皿底脫落，屬于正常現象。如有大量細胞無法從皿底脫落，需延長消化時間。

6. 顯微鏡下觀察細胞呈4 ~ 20個細胞大小的團塊，水平十字搖勻。

7. 將細胞置于5% CO2的37℃恒溫培養箱培養。

8. 每天換液直至達到可以傳代的標準。

注意事項：

培養體系中的一些組分是對人體健康有害的物質，請不要用暴露的皮膚接觸培養體系的液體和有培養體系的液體殘留的容器內部；這部分有害物質的濃度和危害性都較低，如有接觸，立即用自來水沖洗即可。