實時熒光定量 PCR (RT-qPCR）實驗之RNA提取

實時熒光定量 PCR (RT-qPCR）實驗過程中， RNA的提取是參照全式金生物的Transzol up提取試劑盒完成的。

1、離心機4℃預冷，準備試劑：氯仿、異內醇、75%乙醇（用DEPC水配制）、無RNase的水或DEPC水、無酶吸頭及試管，戴口罩、帽子、無粉乳膠手套；

2、取出轉染建模成功24h后的細胞，吸棄培養液，用1×PBS清洗1次；

3、每10cm2生長的細胞加入1mL的Transzol Up, 放置片刻后使用移液槍吹打細胞使其wan全脫落；

4、用移液槍反復吹吸裂解液直至無明顯沉淀，將裂解液全部轉移至標記好的1.5mL EP管中，室溫靜置5min；

5、往每個EP管中加0.2mL氯仿（Transzol Up體積的1/5），混勻振蕩30s，室溫靜置3min；

6、4℃條件下10000g離心15min，離心后RNA主要分布在上層水相中，體積約50%；

7、轉移上層水相于新的EP管中（約400μL，注意不要吸取到下層），每管加入0.5mL異丙醇 （Transzol Up體積的1/2），顛倒混勻，室溫孵育10min；

8、4℃下10000g離心10min后在管側和管底形成膠狀沉淀，吸棄上清，加1mL 75%乙醇吹懸沉淀；

9、4℃下7500g離心5min后棄上清，盡量吸凈，室溫晾干沉淀5min，依細胞量加入30~100μL的RNA溶解液；

10、55℃~60℃金屬浴10min，-80℃冰箱保存備用。