凍存原代細胞的培養操作步驟

原代細胞(primary culture cell)是指從機體取出后立即培養的細胞。有人把培養的第1代細胞與傳10代以內的細胞統稱為原代細胞培養。原代細胞不僅廣泛應用于分子、細胞生物學和生物醫學基礎研究，如蛋白質組學、基因組學、細胞株(系)研究、DNA，RNA和遺傳學研究等。凍存原代細胞的培養操作步驟：

　　1.將一管細胞從液氮罐中取出，注意保護手和眼睛。
 

　　2.將凍存管快速的放入37℃水浴中，輕輕握住并旋轉，直到管內物體*融化。
 

　　3.將凍存管立即從水浴中拿出，擦干，轉入無菌環境。
 

　　4.用70%的酒精沖洗凍存管，然后擦去多余酒精。
 

　　5.打開蓋子，注意手指不要碰到里面的螺紋(注意，由于凍存管有負壓，開蓋時可能會有少量溢出，這是正常現象)。
 

　　6.用多聚賴氨酸包被培養瓶。多數細胞推薦的接種密度為每平方厘米5000個細胞。
 

　　7.蓋好培養瓶的蓋子，輕輕搖晃培養瓶以使細胞分布均勻。若需要氣體交換可打開蓋子。
 

　　8.將培養瓶放入培養箱中。
 

　　9.放入培養箱后第6-16小時更換一次培養基，以去除殘留的二甲基亞楓和未貼壁的細胞。