酶聯免疫試劑盒操作步驟與特性

酶聯免疫試劑盒操作步驟：
1、準備：從冰箱取出試劑盒，室溫復溫平衡30分鐘。
2、配液：用蒸餾水將20倍濃縮洗滌液稀釋成原倍的洗滌液。
3、加標準品和待測樣本：取足夠數量的酶標包被板，固定于框架上，分別設置標準品孔、待測樣本孔和空白對照孔，記錄各孔位置，在標準品孔中加入標準品50μL；待測樣本孔中先加入待測樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL(即樣本稀釋5倍)；空白對照孔不加。
4、溫育：37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min。
5、洗板：棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板4次(也可用洗板機按說明書操作洗板)。
6、加酶標工作液：每孔加入酶標工作液50μL，空白對照孔不加。
7、溫育：重復4的操作。
8、洗板：重復5的操作。
9、顯色：每孔先加入顯色劑A 液50μL，再加入顯色劑B液 50μL，37℃避光顯色15min。
10、終止：取出酶標板，每孔加終止液50μL，終止反應(顏色由藍色立轉黃色)。
11、測定：以空白孔調零，在終止后15分鐘內，用450nm波長測量各孔的吸光值(OD值)。
12、計算：根據標準品的濃度及對應的OD值，計算出標準曲線的直線回歸方程，再根據樣本的OD值，在回歸方程上計算出對應的樣品濃度，也可以使用各種應用軟件來計算。zui終濃度為實際測定濃度乘以稀釋倍數。

酶聯免疫試劑盒特性：
1、應盡量選擇正規，產品經相應部門審核認可，試劑應從靈敏度、特異性、精密度、穩定性、簡便性。
2、靈敏度：有二層含義，1）為試劑檢出被檢物質的量的能力；2）為試劑對大量樣品中陽性檢出的能力。
3、特異性：常用交叉反應率表示。含有與待測物相近結構部份的物質可能存在交叉反應，使測定結果升高，可能導致假陽性，所以交叉反應是評價其質量的關鍵指標。
4、精密度：elisa試劑一般指其批內cv%，其值應小于15%；定量試劑應同時考察線性范圍。
5、準確度：通過添加回收實驗進行評價。
6、簡便性：指在不影響試劑的前三項指標的前題下，實驗和測定步驟越少越好，在定性實驗中結果判斷簡單明了，定量試驗結果計算也應簡單。
7、安全性：指試劑對操作者和環境anquan無害無傳染性。
8、經濟性：試劑在同等質量條件下通過大規模或技術進步降低成本，而市場價格比較合理。
9、試劑評價：產品僅用于科研需要有的確證方法和確證的樣品進行檢測。