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    進口elisa試劑盒操作步驟方法

    時間:2021/4/28閱讀:435
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    進口elisa試劑盒操作步驟:

    實驗開始前,請提前配置好所有試劑,試劑或樣品稀釋時,均需混勻,混勻時盡量避免起泡。如樣品濃度過高時,用樣品稀釋液進行稀釋,以使樣品符合試劑盒的檢測范圍。

    1. 加樣:分別設空白孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl,余孔加待測樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,酶標板加上蓋或覆膜,37℃反應120分鐘。

    2. 棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加辣根過氧化物酶標記抗小鼠IgG工作液
    100μl(取1μl生物素標記抗體加99μl生物素標記抗體稀釋液的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時內配制),37℃,60分鐘。

    3. 溫育60分鐘后,棄去孔內液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干。

    4. 依序每孔加底物溶液90μl,37℃避光顯色(30分鐘內,此時肉眼可見孔內有明顯藍色,即可終止)。

    5. 依序每孔加終止溶液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結果的準確性,底物反應時間到后應盡快加入終止液。

    6. 用酶聯儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值)。 在加終止液后15分鐘以內進行檢測。

    進口elisa試劑盒樣本處理:

    1.剛取得的新鮮組織樣本用PBS洗凈。

    2.準確稱取50mg組織,加入1ml勻漿緩沖液A,用玻璃勻漿器充分勻漿。

    3.在1000g,4℃離心10分鐘,棄沉淀,取上清。

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