進口elisa試劑盒原理與步驟方法

進口elisa試劑盒實驗原理：

  本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中進口elisa試劑盒水平。用純化的小鼠尿微量白蛋白

（mALB）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入尿微量白蛋白

（mALB），再與HRP標記的尿微量白蛋白（mALB）抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，

經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的

黃色。顏色的深淺和樣品中的尿微量白蛋白（mALB）呈正相關。用進口elisa試劑盒在450nm波長下

測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中小鼠尿微量白蛋白（mALB）濃度。

 進口elisa試劑盒操作步驟:

1、標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上設標準品孔10孔，在、第二孔中分別加標準品100μl，然后在、第二孔中加標準品稀釋液50μl，混勻；然后從孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl分別加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為50μl，濃度分別為360μg/L，240μg/L，120μg/L，60μg/L，30μg/L）。

2、加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及進口elisa試劑盒，其余各步操作相同）、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品終稀釋度為5倍）。

3、加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

4、溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

5、配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用。

6、洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。

7、加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。

8、溫育：操作同3。

9、洗滌：操作同5。

10、顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.

11、終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。

12、測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量進口elisa試劑盒各孔的吸光度（OD值）。測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。