elisa試劑盒檢測熒光定量PCR的幾種方法比較

進口elisa試劑盒常見熒光定量PCR方法比較
一、SYBR Green I檢測模式 是一種能與雙鏈 DNA 結(jié)合發(fā)光的熒光染料。其與雙鏈 DNA 結(jié)合后， 熒光大大增強。因此， SYBR Green I 的熒光信號強度與雙鏈 DNA 的數(shù)量相關(guān)，可以根據(jù)熒光信號檢測出 PCR 體系存在的雙鏈 DNA 數(shù)量。SYBR Green I 的zui大吸收波長約為 497nm，發(fā)射波長zui大約為 520nm。PCR 擴增程序一般為 94℃～55℃～72℃三步法，40 個循環(huán)。SYBR Green I 的缺點：由于 SYBR Green I 沒有特異性，不能識別特定的雙鏈，只要是雙鏈就會結(jié)合發(fā)光，對 PCR 反應(yīng)中的非特異性擴增或引物二聚體也會產(chǎn)生熒光，通常本底較高，所以在臨床上使用可能會有假陽性發(fā)生。SYBR Green I 的優(yōu)點：SYBR Green I 的優(yōu)點是因為其缺點產(chǎn)生，由于它能所有的雙鏈DNA相結(jié)合，所以對不同模板不需特別定制不同的特異性探針，通用性較好，并且價格相對較低。這對科研是很有利的，因此國內(nèi)外在科研中使用比較普遍。

二、雜交探針模式(Beacon、FRET)分子信標(biāo)是一種呈發(fā)夾結(jié)構(gòu)的莖環(huán)雙標(biāo)記寡核苷酸探針，兩端的核酸序列互補配對，因此標(biāo)記在一端的熒光基團與標(biāo)記在另一端的淬滅基團緊緊靠近。熒光基團被激發(fā)后產(chǎn)生的光子被淬滅劑淬滅，由熒光基團產(chǎn)生的能量以紅外而不是可見光形式釋放出來。分子信標(biāo)的莖環(huán)結(jié)構(gòu)中，環(huán)一般為 15-30 個核苷酸長，并與目標(biāo)序列互補;莖一般 5-7 個核苷酸長，并相互配對形成莖的結(jié)構(gòu)。熒光基團標(biāo)記在探針的一端，而淬滅劑則標(biāo)記在另一端。在復(fù)性溫度下，因為模板不存在時形成莖環(huán)結(jié)構(gòu)，當(dāng)加熱變性會互補配對的莖環(huán)雙鏈解開，如果有模板存在環(huán)序列將與模板配對。與模板配對后，分子信標(biāo)將成鏈狀而非發(fā)夾狀，使得熒光基團與淬滅劑分開。當(dāng)熒光基團被激發(fā)時，因淬滅作用被解除，發(fā)出激發(fā)光子。由于是酶切作用的存在，分子信標(biāo)也是積累熒光。

三、水解探針模式(Taqman探針)是一種寡核苷酸探針，熒光基團連接在探針的 5’末端， 而淬滅劑則在 3’末端。當(dāng)探針與靶序列配對時，熒光基團發(fā)射的熒光因與 3’端的淬滅劑接近而被淬滅。在進行延伸反應(yīng)時，聚合酶的 5’外切酶活性將探針切斷，使得熒光基團與淬滅劑分離，發(fā)射熒光。一分子的產(chǎn)物生成就伴隨著一分子的熒光信號的產(chǎn)生。隨著擴增循環(huán)數(shù)的增加，釋放出來的熒光基團不斷積累。因此 Taqman 探針檢測的是積累熒光。進口elisa試劑盒
明黨參    規(guī)格：1g    英文名稱：Changium smyrnioides        保存：-20℃，避光
苦楝皮    規(guī)格：2g    英文名稱：Chinaberry bark        保存：-20℃，避光
雞冠花    規(guī)格：2g    英文名稱：Cockscomb        保存：-20℃，避光
伸筋草    規(guī)格：1g    英文名稱：Lycopodium clavatum        保存：-20℃，避光
扶芳藤    規(guī)格：10.0g    英文名稱：Euonymus fortunei        保存：-20℃，避光
蘆根    規(guī)格：1g    英文名稱：Reed rhizome        保存：-20℃，避光
花椒(青椒)    規(guī)格：2g    英文名稱：Pepper (pepper)        保存：-20℃，避光
麥芽    規(guī)格：5g    英文名稱：Malt        保存：-20℃，避光
卷柏(墊狀卷柏)    規(guī)格：2g    英文名稱：Selaginella (Selaginella pulvinata)        保存：-20℃，避光
紅芪    規(guī)格：5g    英文名稱：Radix Hedysari        保存：-20℃，避光
紅大戟    規(guī)格：3g    英文名稱：Knoxia valerianoides        保存：-20℃，避光
肉蓯蓉    規(guī)格：1g    英文名稱：Rou Congrong        保存：-20℃，避光
百合    規(guī)格：1g    英文名稱：Lily        保存：-20℃，避光

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