滬鼎生物|化合物純度的鑒定方法

一、TLC純度的鑒定：

1.展開(kāi)溶劑的選擇，至少需要3種不同極性展開(kāi)系統(tǒng)展開(kāi)，首先要選擇三種分子間作用力不同的溶劑系統(tǒng)，如氯/仿/甲醇，環(huán)己/烷/乙酸乙酯，正/丁醇/醋酸/水，分別展開(kāi)來(lái)確定組分是否為單一斑點(diǎn)。這樣做的好處很明顯，通過(guò)組份間的各種差別將組份分開(kāi)，有可能幾個(gè)相似組份在一種溶劑系統(tǒng)中是單一斑點(diǎn)，因?yàn)樵撊軇┫到y(tǒng)與這幾個(gè)組份的分子間力作用無(wú)顯著的差別，不足以在TLC區(qū)分。而換了分子間作用力不同的另一溶劑系統(tǒng)，就有可能分開(kāi)。這是用3種不同極性展開(kāi)系統(tǒng)展開(kāi)所不能達(dá)到的。

2.對(duì)于一種溶劑系統(tǒng)，至少需要3種不同極性展開(kāi)系統(tǒng)展開(kāi)，其一種極性的展開(kāi)系統(tǒng)將目標(biāo)組分的Rf推至0.5，另兩極性的展開(kāi)系統(tǒng)將目標(biāo)組分的Rf推至0.8，0.2。作用是檢查有沒(méi)有極性比目標(biāo)組分更大或更小的雜質(zhì)。

3.顯色方法，光展開(kāi)是不夠的，還要用各種顯色方法。一般一定要使用通用型顯色劑，如10%硫酸，碘，因?yàn)槊糠N顯色劑（不論是通用型顯色劑，還是專屬顯色劑在工作中都遇到他們都有一化合物不顯色的時(shí)候），再根據(jù)組分可能含有混雜組份的情況，選用專屬顯色劑。只有在多個(gè)顯色劑下均為單一斑點(diǎn)，這時(shí)才能下結(jié)論樣品為薄層純。

熔程判斷純度：原理很簡(jiǎn)單，純化合物，熔程很短，1，2度。混合物熔點(diǎn)下降，熔程變長(zhǎng)。

二、HPLC的純度鑒定：

對(duì)于HPLC因?yàn)槌Ｓ玫南到y(tǒng)較少，加之其分離效果好，一般不要求選擇三種分子間作用力不同的溶劑系統(tǒng)，只要求選這三種不同極性的溶劑系統(tǒng)，使目標(biāo)峰在不同的保留時(shí)間出峰。

三、軟電離質(zhì)譜的純度鑒定：

如ESI-MS，APCI-MS。大極性化合物選用ESI-MS，極性很小的化合物選用APCI-MS，這些軟電離質(zhì)譜的特點(diǎn)是只給出化合物的準(zhǔn)分子離子峰，通過(guò)正負(fù)離子的相互溝通來(lái)確定分子量。如果樣品不純，就會(huì)檢出多對(duì)準(zhǔn)分子離子峰，不但確定了純度，還能明確混雜物的分子量。

四、核磁共振的純度鑒定：

從氫譜中如果發(fā)現(xiàn)有很多積分不到一的小峰，就有可能是樣品是樣品中的雜質(zhì)。利用門(mén)控去偶的技術(shù)通過(guò)對(duì)碳譜的定量也能實(shí)現(xiàn)純度鑒定。

每種方法多有各自的局限性，如基于氫譜的純度鑒定，如果發(fā)現(xiàn)有很多積分不到一的小峰，還有可能使樣品中的活潑質(zhì)子，基于軟電離質(zhì)譜的純度鑒定，如果混雜物的分子量與目標(biāo)物一樣就無(wú)法檢出。

對(duì)化合物純度，世界上不存在100%純的化合物。希望要多高的純度應(yīng)該與目的有關(guān)，例如，想測(cè)核磁共振鑒定結(jié)構(gòu)，一般要求95%的純度，如果想測(cè)EI-MS，純度越高越好最好是99%以上。