ELISA實驗疑難問題解答

ELISA實驗做了很多次，可是結果還是有偏差？可能很多同學都會出現這樣的問題，那么問題到底出在哪呢，今天小編就來給大家總結一下，ELISA實驗中會經常遇見的問題。

1.非正常的樣本值
①不正確的收集或保存
解決方案：確保正確的底物體積混合。如果底物是凍干粉，用相應緩沖液重懸*，充分混合并在一定時間內使用。
②不正確的樣本制備
說明書中樣本制備方法已經過性能測試驗證，嚴格按照說明書推薦進行。確保使用正確的校正稀釋液。

2.信號強度增長不充分
①底物準備有誤
解決方案：確保正確的底物體積并混合。如果底物是凍干粉，用相應緩沖液重懸*，充分混合并在一定時間內使用。
②每孔底物添加體積有誤
解決方案：保證移液器正常工作，必要時進行重新校正。保證移液器吸頭連接緊密。
③孵育時間或溫度有誤
解決方案：嚴格按照推薦的孵育時間和溫度進行實驗，避免在環境條件變化的位置孵育96孔板（如放在通風處或窗臺邊）。
④偶聯物或底物準備有誤
解決方案：確保混合相同體積的偶聯物和底物。加入后會立即顯色。底物在使用前應避光保存。
⑤儀器設置不正確
解決方案：確保酶標儀使用了正確的濾光片，確保按照說明書，正確的配置儀器參數。

3.邊緣效應
①工作臺溫度不均衡
解決方案：避免在環境條件變化的位置孵育，如放在通風處或窗臺邊。
②體系液體蒸發
解決方案：保證移液器正常工作，必要時進行重新校正。保證移液器吸頭連接緊密。
③疊板
孵育時避免疊板。