關于冷凍細胞活化

1.冷凍原則

冷凍細胞之活化原則為快速解凍，以避免冰晶重新結晶而對細胞造成傷害，導致細胞之死亡。 

2.細胞活化后，約需數日，或繼代一至二代。其細胞生長或特性表現才會恢復正常(例如產生單株抗體或是其它蛋白質)。

3.材料 ：

①37 oC 恒溫水槽 

②新鮮培養基 

③無菌吸管/ 離心管/ 培養瓶 

④液氮或干冰容器 

4.操作步驟： 

①操作人員應戴防護面罩及手套，防止冷凍管可能爆裂之傷害。 

②自液氮或干冰容器中取出冷凍管，檢查蓋子是否旋緊，由于熱脹冷縮過程，此時蓋子易松掉。 

③將新鮮培養基置于37 °C 水槽中回溫，回溫后噴以70 % 酒精并擦拭之，移入無菌操作臺內。 

④取出冷凍管，立即放入37 °C 水槽中快速解凍，輕搖冷凍管使其在1 分鐘內全部融化，以70%ethanol 擦拭保存管外部，移入無菌操作臺內。 

⑤取出0.9 ml 解凍之細胞懸浮液，緩緩加入有培養基之培養容器內(稀釋比例為1:10～1:15)，混合均勻，放入CO2 培養箱培養。另取0.1 ml 解凍細胞懸浮液作存活測試。 

⑥解凍后是否立即去除冷凍保護劑(例如DMSO 或glycerol)，依細胞種類而異，一般而言，大都不需要立即去除冷凍保護劑。惟若要立即去除，則將解凍之細胞懸浮液加入含有5-10 ml 培養基之離心管內，離心1,000 rpm, 5 分鐘，移去上清液，加入新鮮培養基，混合均勻，放入CO2 培養箱培養。 

⑦若不需立即去除冷凍保存劑，則在解凍培養后隔日更換培養基。

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