共享:培養基濕熱滅菌操作方法

    什么是培養基滅菌？為什么要滅菌？給培養基滅菌的方法有很多，如干熱滅菌、濕熱滅菌等。大多數的培養基滅菌都是使用濕熱滅菌法了，今天上海滬鼎與您共享培養基濕熱滅菌操作方法。
一、熱滅菌的主要原理
    1.微生物的熱阻
    2.對數殘存定律
    3.理論滅菌時間的計算
    4.滅菌溫度的選擇
 

二、影響滅菌效果的因素
    1.微生物種類：不同的微生物k值不同。
    2.初始菌量：在保持N值不變的前提下，t與初始菌量N0的對數成正比。
    3.培養基成份：油脂、蛋白質增加微生物的耐熱性。
    4.傳熱與混合狀況：影響受熱均勻度。
    5.培養基中固體顆粒的存在影響熱穿透。
    6.蒸汽中空氣的存在降低蒸汽分壓和滅菌溫度。
    7.pH：酸性pH下可加快微生物熱死速率

三、培養基的工業滅菌
    1.實驗室種子培養基滅菌方法
    ①高壓蒸汽滅菌鍋、 手提式滅菌鍋。容量小。
    ②立式或臥式滅菌鍋，容量較大，一般能裝幾十瓶或幾百瓶。
    ③滅菌柜，要和蒸汽鍋爐配套， 用于大量種瓶培養基的滅菌， 一次能裝幾百至幾千瓶(袋)。
    2.培養基的分批滅菌
    ①定義：將配制好的培養基輸入發酵罐中，用蒸汽加熱，使培養基和設備同時滅菌的一種滅菌方式，又稱實罐滅菌。
    ②滅菌過程
    過程包括升溫、保溫和冷卻等三個階段，各階段對滅菌的貢獻：20%、75%、5%。培養基的升溫可由兩種方式實現：間接加熱，在夾套或蛇管中通入蒸汽加熱；直接加熱，在培養基中直接通入熱蒸汽加熱。
    滅菌過程中加熱和保溫階段的滅菌作用是主要的，而冷卻階段的滅菌作用是次要的，一般很小，可以忽略不計。此外，還應指出的是，應當避免長時間的加熱階段，因為加熱時間過長，不僅破壞營養物質，而且也有可能引起培養液中某些有害物質的，從而影響培養過程的順利進行。
    在實際生產中，也可能遇到所供蒸汽不足、溫度不夠高的情況，這時可以適當延長滅菌時間。生產上甚至有用100℃蒸煮而達到*滅菌的實例。如要做固體曲而沒有高溫蒸汽時，可將原料用100蒸汽蒸30min，殺死其中的營養細胞，但孢子與細菌的芽孢沒有被殺死。
    將蒸過的原料置于室溫下過夜，未被殺死的孢子便發芽生長，芽孢發育成營養細胞，再30min便可殺死。如此連續反復進行2-3次，亦可達到*滅菌的目的。

    3.分批滅菌的操作
    分批滅歇是在所用的發酵罐或其他培養裝置中進行的，它是在配制罐中配好培養基后，通過管道輸入發酵罐等培養設備中，然后開始滅菌。在進行培養基的間歇滅菌之前，通常先將發酵罐等培養裝置的分空氣過濾器進行滅菌，并且用空氣將分過濾器吹干。開始滅菌時，應先放去夾套或蛇管中的冷水，開啟排氣管閥，通過空氣管向發酵罐內的培養基通入蒸汽進行加熱，同時，也可在夾套內通蒸汽進行間接加熱。
    當培養基溫度升到70℃左右時，從取樣管和放料管向罐內通入蒸汽進一步加熱，當溫度升至120℃，罐壓為1 105Pa（表壓）時，打開接種、補料、消泡劑、酸、堿等管道閥門進行排汽，當然在保溫過程中，應注意凡在培養基液面下的各種進口管道都應通入蒸汽，而在液面以上的其余各管道則應排放蒸汽，這樣才能不留死角，從而保證滅菌*。保溫結束后，依次關閉各排汽、進汽閥門，待罐內壓力低于空氣壓力后，向罐內通入無菌空氣，在夾套或蛇管中通冷水降溫，使培養基的溫度降到所需的溫度，進行下一步的發酵和培養。
    由于培養基的間歇滅菌不需要專門的滅菌設備，投資少，對設備要求簡單，對蒸汽的要求也比較低，且滅菌效果可靠，因此，間歇滅菌是中小型生產工廠經常采用的一種培養基滅菌方法。
 

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