技術重點:如何處理ELISA試劑盒的六大重點標本

    ELISA方法優點多，易操作，能夠檢測數種標本，因而廣受科研人員的歡迎。然而，能夠影響到ELISA實驗結果的因素有很多，其中就包括標本的處理。但是不同類型的標本處理方法不同，不同的標本應如何處理呢？上海滬鼎教您處理ELISA試劑盒的六大重點標本：
一、尿液、唾液 
    1000×g離心20min，取上清即可檢測。但由于ELISA只能檢測可溶性蛋白的含量，應保證所有樣本均為澄清的液體，沉淀或懸浮物都應離心去除。為了保證檢測的準確性，保存于-20℃或-80℃的樣本在1~6個月內檢測；4℃保存的樣本應在1周內進行檢測。
    注意：還應保證樣本不含NaN3，因為NaN3會抑制HRP的活性，從而導致假陰性的結果。
二、細胞裂解液
① 吸去培養板內的培養基，用胰酶消化細胞，加適量培養基將細胞從培養板上吹下來。懸浮細胞可省略。
② 收集細胞懸液，1000×g離心10min，棄去培養基，用預冷的PBS潤洗3次。
③ 加入適量的預冷PBS或細胞裂解液(臨用前加入蛋白酶抑制劑)重懸細胞。通常6孔板一個孔的細胞量需要150~250μL PBS重懸。
④ 將樣品放入-20℃或-80℃，使樣品冷凍，再放室溫解凍樣品，反復凍融幾次，使細胞充分裂解。也可將樣品進行超聲破碎，以達到裂解的目的。
⑤ 4℃10000×g離心10min，除去細胞碎片，取上清，-20℃或-80℃保存，避免反復凍融。
三、細胞培養上清
    取細胞培養上清到離心管，1000×g離心20min，除去細胞碎片及雜質，取上清，-20℃或-80℃保存，避免反復凍融。
四、組織勻漿液
① 將組織樣本用PBS(0.01M, PH 7.4)沖洗，洗去組織表面殘留的血液或雜質。
② 將組織塊稱重，記錄后剪碎，碎塊應盡量小，便于勻漿得更充分
③ 將組織按一定的比例加入預冷的PBS(臨用前加入蛋白酶抑制劑)勻漿，勻漿時置于冰上或冰浴中。(通常按組織重量：PBS體積=1:9的比例勻漿)
④ 吸取勻漿液到離心管，4℃5000×g離心5~10min，取上清，-20℃或-80℃保存，避免反復凍融。
五、血清
    用無熱原、無內毒素的試管或離心管采集血液標本，將試管或離心管室溫放置2小時或4℃放置一個晚上，使血清析出。(將試管或離心管傾斜放置，使液面橫截面增大，能使血清更大程度的析出)4℃1000×g離心20分鐘，仔細收集上清。建議將血清分裝多份，-20℃或-80℃保存，避免反復凍融。
    注意：采血過程中應避免溶血，因為紅細胞裂解時會釋放具有過氧化酶活性的物質，在以HRP為標記的ELISA檢測中會有非特異性的顯色，而導致檢測的不準確性。同時也應避免細菌污染，因為菌體內可能含有內源性的HRP從而導致檢測的假陽性。
六、血漿
    用含抗凝劑的采血管或離心管采集血液標本，標本采集后30min內4℃ 1000×g離心15min，取上清即血漿。將上清分裝多份，-20℃或-80℃保存，避免反復凍融。避免使用溶血或高血脂的標本。
 
    以上ELISA實驗的六大重點檢測標本的處理方法，你掌握了嗎？實驗標本的收集盒處理以及ELISA試劑盒實驗操作中都需要您認真對待與足夠的耐心。本公司可為您提供ELISA試劑盒免費代檢測服務，上海本地還可以上門取樣！