技術(shù)分析：ELISA實驗常見問題解答

吉林醫(yī)藥學(xué)院張老師前期在我司訂購小鼠ELISA試劑盒，之后咨詢我司相關(guān)問題，錢及時技術(shù)人員為張老師解答，解答詳情如下：

1、為什么ELISA實驗必須設(shè)置復(fù)孔？

答：為獲得更準(zhǔn)確的實驗結(jié)果，強(qiáng)烈建議標(biāo)準(zhǔn)品及樣本進(jìn)行復(fù)孔檢測，因為復(fù)孔檢測可以：計算平均值，確保實驗結(jié)果更準(zhǔn)確；解決實驗中誤操作造成的跳孔現(xiàn)象；計算CV值，對實驗的操作和試劑盒的精密度進(jìn)行評估。

2、為什么所有試劑和檢測樣本要平衡至室溫后再進(jìn)行加樣操作？

答：溫度是ELISA結(jié)合反應(yīng)的重要影響因素。為了使所有樣本在一致的溫度下反應(yīng)，實驗前務(wù)必將所有試劑平衡至室溫，包括檢測樣本。避免因溫度的動力學(xué)反應(yīng)差異而導(dǎo)致ELISA檢測結(jié)果的不準(zhǔn)確。

3、 重復(fù)性差是怎么回事？

答：對于這一點，很有可能是：

① 樣品數(shù)量不一，加樣時間長短不一（恒遠(yuǎn)來解決：重復(fù)某一樣品時，加樣時間盡可能與*次接近）。

③ 酶標(biāo)儀濾光片不對或輸入波長不對（恒遠(yuǎn)來解決：TMB顯色用450/630波長）。

④ 酶標(biāo)儀測定重復(fù)性差（恒遠(yuǎn)來解決：校對酶標(biāo)儀）。

4、為什么標(biāo)準(zhǔn)曲線線性較差？ 

答：需要按照推薦方式保存標(biāo)準(zhǔn)品；溶解標(biāo)準(zhǔn)品之前需短暫離心，*收集粉末；確保標(biāo)準(zhǔn)品*溶解和混勻，然后再進(jìn)行后續(xù)的系列稀釋步驟，確保每一步都充分混勻且移液；顯色的恰當(dāng)終止；選擇合適的數(shù)學(xué)擬合方程繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。