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    豚鼠降鈣素基因相關(guān)肽elisa試劑盒的操作程序

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    豚鼠降鈣素基因相關(guān)肽elisa試劑盒的操作程序:

    1. 包被:用包被液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為0.5~20μg/ml,按100ul/孔加入酶標(biāo)板,  4℃包被過夜。

    2. 洗板:次日棄去孔內(nèi)液體,在紙巾上輕輕扣打以吸去殘留液體,加入洗滌液(約280-300ul/孔),漂洗2-3次,每次3-5min;

    3.  封閉:按200-250ul/孔加入封閉液,室溫2-3小時或37℃1-2小時,也可4℃封閉過夜,然后棄去孔內(nèi)封閉液;

    4.  樣品處理:用洗滌液或樣品稀釋液將待檢樣品(含未知抗原)稀釋至所需濃度; 

    5. 標(biāo)準(zhǔn)液:用洗滌液或樣品稀釋液將標(biāo)準(zhǔn)液稀釋至所需濃度(定性分析可省略本步驟);

    6. 加樣:按排列順序依次加入50-100ul/孔稀釋好的標(biāo)準(zhǔn)液、處理過的待檢樣品、陰性對照及陽性對照,室溫或37℃孵育30-60min;

    7.  洗板:同步驟2;豚鼠降鈣素基因相關(guān)肽(CGRP)ELISA試劑盒 

    8. 加酶標(biāo)抗體:酶標(biāo)抗體的稀釋按產(chǎn)品說明書,按50-100ul/孔加入新鮮配制的酶標(biāo)抗體,室溫或37℃孵育1小時;

    9.  洗板:同步驟2;  

    10. 加底物液顯色:按100-150ul/孔加入新配制的TMB底物溶液,室溫避光反應(yīng)15~30分鐘。

    11. 終止反應(yīng):于各反應(yīng)孔中加入50ul的終止液。

    12. 結(jié)果判定:可于白色背景上,直接用裸眼觀察結(jié)果,豚鼠降鈣素基因相關(guān)肽(CGRP)ELISA試劑盒反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深,陽性程度越強,陰性反應(yīng)為無色或極淺,依據(jù)所呈顏色的深淺,以“+”、“-”號表示。也可在酶標(biāo)儀上于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處測OD值。檢測時以空白對照孔調(diào)零后測各孔OD值,若樣品孔中的OD值大于陰性對照孔的2.1倍,即為陽性。

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