ELISA 實驗中各類組織勻漿樣品收集

ELISA 實驗中各類組織勻漿（不易勻漿的組織）樣品的采集、處理和保存。

1、采集組織，在冰冷的生理鹽水中漂洗，除去血液，濾紙拭干，稱重，剔除附屬的結締組織，稱取組織塊。

2、用移液管量取 0.1M PBS 或者用 0.86％冷生理鹽水，勻漿介質或生理鹽水的體積總量應該是組織塊重量的 9 倍，用眼科小剪盡快剪碎組織塊（天然時操作要在冰水浴中進行，將盛有組織 的小燒杯放入冰水中）。

3、勻漿的方式有多種：

a)手工勻漿：將剪碎的組織倒入玻璃勻漿管中，再將剩余的 1/3 勻漿介質或生理鹽水沖洗殘留在燒杯中的碎組織塊，一起倒入勻漿管中進行勻漿，左手持勻漿管將下 端插入盛有冰水混合物的器皿中，右手將搗桿垂直插入套管中，上下轉動研磨數十次（6～8 分鐘），充分研碎，使組織勻漿化。

b)機器勻漿：用組織搗碎機 10000～15000r/min 上下研磨制成 10％組織勻漿，也可用內切式組織勻漿機制備（勻漿時間 10 秒/次，間隙 30 秒，連續 3～5 次，在冰水中進行），皮膚、肌肉組織等可延長勻漿時間。

c) 超聲粉碎：用超聲粉碎機進行粉碎，可用 Soniprep150 型超聲波發生器以振幅 14 微米超聲處理 30 秒使細胞破碎，也可用國產超聲波發生儀，用 40 安培，5 秒/次，間隙 10 秒反復 3～5 次。

4、將制備好的 10％勻漿用離心機 4℃，3000rpm 離心 15min，將離心好的勻漿留上清，棄下面沉淀。

5、取上清。 分裝凍存備用，

2-8℃下，可放置保存 24-48 小時；

-20℃下，可放置保存 1 個月；

-70℃下，可放置保存 6 個月；

6、根據你的實驗需要，取適量上清夜進行各種 ELISA 測定。