ELISA酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)常見(jiàn)類(lèi)型特點(diǎn)

     ELISA實(shí)驗(yàn)就是酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（Enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）是將抗原或抗體結(jié)合在固相載體表面，利用抗原抗體的特異性結(jié)合以及抗體或者抗原上標(biāo)記的酶催化特定底物發(fā)生顯色反應(yīng)，實(shí)現(xiàn)目標(biāo)物檢測(cè)的免疫分析方法，可測(cè)至皮摩爾（pmol）級(jí)別。

ELISA常見(jiàn)類(lèi)型：

直接法：

將抗原按一定的比例稀釋好包被到固相載體上，然后加入稀釋好的特異性的酶標(biāo)抗體，孵育后加入底物顯色并判讀結(jié)果。

特點(diǎn)：

適用于檢測(cè)小分子抗原，優(yōu)勢(shì)：實(shí)驗(yàn)步驟少，檢測(cè)速度快，無(wú)須使用二抗可避免交互反應(yīng)，結(jié)果較準(zhǔn)確。缺點(diǎn)：每種靶蛋白都需要準(zhǔn)備能夠與其特異性結(jié)合的一抗，實(shí)驗(yàn)靈活性低，靈敏度低。

間接法：

將已知抗原連接在固相載體上，待測(cè)抗體與抗原結(jié)合后再與酶標(biāo)二抗結(jié)合，形成抗原一待測(cè)抗體-酶標(biāo)二抗的復(fù)合物，復(fù)合物的形成量與待測(cè)抗體量成正比，屬非競(jìng)爭(zhēng)性反應(yīng)類(lèi)型。

特點(diǎn)：

常用于抗體的檢測(cè)，只要更換不同的固相抗原，可以用一種酶標(biāo)抗體檢測(cè)各種與抗原相應(yīng)的抗體。優(yōu)勢(shì)：二抗可以加強(qiáng)信號(hào)，而且有多種選擇能做不同的測(cè)定分析。不加酶標(biāo)記的一級(jí)抗體則能保留它多的免疫反應(yīng)性。缺點(diǎn)：可能會(huì)發(fā)生交叉反應(yīng)，與直接法比，實(shí)驗(yàn)周期長(zhǎng)。

夾心法：

類(lèi)型：分為直接夾心和間接夾心。檢測(cè)抗體是酶標(biāo)抗體，則可稱(chēng)為直接夾心ELISA；檢測(cè)抗體不帶有標(biāo)記，則還需要使用酶標(biāo)二抗與檢測(cè)抗體結(jié)合，這種稱(chēng)為間接夾心ELISA。

直接夾心又分為雙抗體夾心和雙抗原夾心。夾心ELISA實(shí)驗(yàn)需要用到配對(duì)抗體（捕獲抗體和檢測(cè)抗體），原理：將捕獲抗體結(jié)合到ELISA板上，通過(guò)捕獲抗體固定抗原，隨后通過(guò)直接或間接ELISA的方式進(jìn)行檢測(cè)。在夾心ELISA實(shí)驗(yàn)中，最重要的是對(duì)配對(duì)抗體進(jìn)行驗(yàn)證，確保配對(duì)抗體能同時(shí)與抗原結(jié)合，以確保實(shí)驗(yàn)的順利進(jìn)行。

特點(diǎn)：

常用于抗原測(cè)定，適用于測(cè)定二價(jià)或二價(jià)以上的大分子抗原，不適用于測(cè)定半抗原及小分子單價(jià)抗原。優(yōu)點(diǎn)：高靈敏、高專(zhuān)一性，抗原無(wú)須事先純化。缺點(diǎn)：抗原一定得擁有兩個(gè)以上的抗體結(jié)合部位。

競(jìng)爭(zhēng)法：

首先將特異性抗體吸附于固相載體表面，經(jīng)洗滌后分成兩組：一組加酶標(biāo)記抗原和被測(cè)抗原的混合液；而另一組只加酶標(biāo)記抗原，再經(jīng)孵育洗滌后加底物顯色，這兩組底物降解量之差，即為所要測(cè)定的未知抗原的量。這種方法所測(cè)定的抗原只要有一個(gè)結(jié)合部位即可。

特點(diǎn)：

常測(cè)定小分子抗原：如激素和藥物之類(lèi)，也可以用來(lái)檢測(cè)大分子抗原物質(zhì)甚至是抗體。檢測(cè)大分子抗原物質(zhì)時(shí)，由于空間位阻的影響，使得該檢測(cè)方法沒(méi)有雙抗體夾心法檢測(cè)大分子抗原物質(zhì)靈敏度高。優(yōu)勢(shì)：可適用不純的樣本，快速高效。 缺點(diǎn)：整體的敏感性和專(zhuān)一性都較差。